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革兰氏阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)是公认的主要的牙周可疑致病菌。牙龈素是牙龈卟啉单胞菌分泌的胞外蛋白酶,是其重要的毒力因子。与牙周病密切相关的牙龈素包括两种,精氨酸特异性蛋白酶(Arginine-gingipains,Rgps)阳赖氨酸特异性蛋白酶(Lysine-gingipain, Kgp)。其中Rgps又称卟啉素,分为RgpA和RgpB两种。RgpA和Kgp均为非共价复合物,包一个N-末端前肽区,蛋白水解区和一个C-末端粘附素区(HGP15[HbR],HGP17,HGP27和HGP44),具有独立的催化区域和凝集区域。HGP44是两种牙龈素上共有的一段粘附素区域,HGP44能够通过粘附到HIV-1 gp120蛋白上,阻断HIV-1外膜介导的膜融合,进一步阻断HIV感染。同时,P.g诱导的血小板聚集依赖细胞内编码HGP44粘附素的基因Hgp44。本研究的目的是克隆表达P.g蛋白酶的粘附素编码基因Hgp44,用于Hgp44的单克隆及多克隆抗体的制备,为进一步研究Hgp44的致病性及P.g促进血小板聚集的具体机制,以及明确牙周病与冠心病之间的关系垫定基础。[方法]本文通过PCR方法扩增得到P.gATCC 33277的Hgp44基因,T-A克隆连接到pMD 18-T载体,酶切连接到pET22b表达载体上,转化到BL21(DE3)中,构建Hgp44-pET22b-BL21(DE3)重组菌。IPTG诱导重组菌表达蛋白,SDS-PAGE初步鉴定。[结果]扩增出目的片段Hgp44,与GenBank中等位基因序列比对,其同源性达95%;克隆重组后转化受体菌,成功诱导该重组菌表达目的蛋白HGP44。[结论]成功构建Hgp44一pET22b-BL21(DE3)重组菌并诱导该重组菌表达目的蛋白HGP44,为继续研究HGP44的特性及其促进血小板聚集的具体机制垫定基础。