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本研究以工厂化养殖的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)和牙鲆(Paralichthys olivaceus)为研究对象,运用组织学切片、荧光实时定量、RNA原位杂交、免疫组织化学、免疫印迹等方法,对半滑舌鳎和牙鲆亲鱼卵巢中不同发育时期的卵母细胞、不同组织中膜孕激素受体(m PRα)和新型膜孕激素受体(m PRL)基因及其蛋白的表达特征进行了定量和定性研究;并研究了外源促性腺激素对半滑舌鳎成熟卵巢不同发育时期卵母细胞这m PRα、m PRL基因和蛋白的表达影响。通过分析半滑舌鳎和牙鲆卵母细胞不同发育阶段和繁殖相关组织中m PRα和m PRL的表达情况,为探讨两种膜孕激素受体的生理功能奠定基础,同时为提高鲆鲽类的人工繁殖技术提供了理论依据。研究结果如下:1.半滑舌鳎m PRα和m PRL在不同发育时相卵母细胞中基因的表达量变化通过Real-time荧光定量和western-blotting技术研究了m PRα和m PRL在舌鳎不同卵巢发育期的不同发育时相卵母细胞中基因的表达,以及不同浓度HCG处理对卵巢发育V期鱼不同发育时相卵母细胞m PRα和m PRL基因和蛋白的表达影响。结果显示:在不同发育期卵巢中,m PRα和m PRL m RNA的表达最高值出现在半滑舌鳎卵母细胞的不同发育时相,但整体趋势大体一致。在卵巢发育II期,处于II时相的卵母细胞m PRα、m PRL m RNA的表达量最高(P<0.05)。在卵巢发育III和IV期,处于IV时相的卵母细胞m PRα、m PRL m RNA表达量最高(P<0.05)。在卵巢发育V期,处于V时相卵母细胞m PRα、m PRL m RNA表达量最高(P<0.05)。卵母细胞m PRα、m PRL m RNA表达的最高值出现在性腺发育V期舌鳎的V时相卵母细胞,表明m PRα和m PRL主要在成熟阶段发挥作用。采用不同浓度HCG处理卵巢发育V期舌鳎不同时相的卵母细胞,并对其表达量进行检测。结果显示:20IU/ml HCG对m PRα与m PRL m RNA和蛋白表达的调控作用比10IU/ml HCG作用更明显,表明m PRα和m PRL m RNA和蛋白表达对HCG调控作用存在剂量依存关系。并且HCG对舌鳎不同时相的卵母细胞的促成熟作用效果不同,在V时相促进作用最明显(P<0.05),表明m PRα和m PRL主要在成熟阶段发挥作用。HCG激素调控作用下,m PRα和m PRL的正向应答效应预示其参与了卵母细胞成熟调控。2.半滑舌鳎m PRα和m PRL在不同组织中基因和蛋白表达分析通过western-blotting技术分析舌鳎不同组织中m PRα和m PRL的蛋白表达量情况。通过RNA原位杂交、免疫组化等方法分析舌鳎不同组织切片中m PRα、m PRL m RNA和蛋白的分布情况。免疫印迹结果显示:m PRα和m PRL蛋白在性腺、脑中表达量较高,在肝、肾、头肾、垂体组织中也有表达,但表达量相对较低;说明m PRα和m PRL主要在性腺、脑组织中发挥作用。RNA原位杂交、免疫组化结果显示:m PRα、m PRL m RNA和蛋白都在卵巢成熟期的卵母细胞膜上表达丰富。m PRα和m PRL的阳性信号物质在卵母细胞的细胞膜中分布明显。进一步证明m PRα和m PRL为膜上的受体并在膜上行使其生理功能。在舌鳎肝脏、肾脏、头肾、脑、垂体也都检测到m PRα和m PRL阳性信号,分布于组织的不同部位。m PRα和m PRL在垂体、头肾、肾脏、脑、肝脏上均有表达,在垂体、头肾、肾脏、脑上主要显色在组织的外周部分,在外周部位呈零星分布。在肝脏主要显色在胆小管和肝静脉等与外界联系的管腔周围,在肾脏中也观察到其在肾小管附近表达丰富。进一步从形态学上解析m PRα和m PRL在不同组织中的表达特点,证明其在不同组织中能够介导孕激素行使不同生理作用。3.牙鲆m PRα和m PRL在不同发育时相卵母细胞中基因表达分析通过Real-time荧光定量技术分析研究了m PRα和m PRL在成熟卵巢中不同发育时期卵母细胞中基因的表达。结果显示:卵母细胞m PRα、m PRL m RNA表达的最高值出现在性腺发育V期牙鲆的V时相卵母细胞(P<0.05)。m PRα、m PRL m RNA表达变化趋势的一致性说明m PRα、m PRL基因在性腺发育V期牙鲆的V时相卵母细胞的作用效果最明显。4.牙鲆m PRα和m PRL在不同组织中基因和蛋白表达分析通过western-blotting技术分析不同组织中m PRα和m PRL的蛋白表达量情况。通过RNA原位杂交、免疫组化等技术分析不同组织中m PRα、m PRL m RNA和蛋白的分布情况。免疫印迹结果显示:m PRα和m PRL蛋白在脑、性腺中表达量都很高,在肝、肾、头肾组织中也有表达,但表达量相对较低。说明m PRα和m PRL主要在性腺和脑组织中发挥作用。RNA原位杂交、免疫组化结果显示:m PRα、m PRL m RNA和蛋白都在卵巢成熟期的卵母细胞膜上显著表达。m PRα、m PRL m RNA基因杂交的阳性信号物质在卵母细胞的细胞膜中分布明显;从形态学上进一步证明m PRα和m PRL为膜上的受体,并在膜上行使其生理功能。在肝脏、肾脏、头肾、脑也都检测到m PRα和m PRL的杂交信号,分布于组织的不同部位。m PRα和m PRL蛋白在头肾、肾脏、脑、肝脏上均有表达,在头肾、肾脏、脑上主要显色在组织的外周部分。在肝脏和肾脏中观察到其在胆小管,肝静脉以及肾小管等管腔周围表达明显。进一步从形态学上解析m PRα和m PRL在不同组织中的表达特点,说明其在不同组织中可以介导孕激素行使不同生理作用。