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目的:通过体外培养比较HepG2.2.15与HepG2细胞的形态结构、生长增殖以及MTA1、MMP2和MMP9的表达情况,进一步了解HepG2.2.15细胞的生物学特性,探讨HBV的复制与表达对肝癌细胞影响,并进一步了解HBV在HCC侵袭转移中的作用。
方法:HepG2.2.15细胞体外培养的成功是本实验成功的关键。倒置显微镜下及电镜下观察两株细胞的形态结构。ELISA法检测HepG2.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达情况,对HepG2.2.15细胞进行鉴定。MTT法测定HepG2.2.15和HepG2细胞的增殖情况。免疫细胞化学、Westem blot检测HepG2.2.15和HepG2细胞中MTA1的表达,免疫细胞化学检测HepG2.2.15和HepG2细胞中MMP2、MMP9的表达。
结果:HepG2.2.15细胞体外培养要求高,与单层贴壁生长的HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞虽也贴壁生长但更容易成团呈多层生长,且消化时不易吹打。HepG2.2.15细胞比HepG2细胞的体积大,HepG2.2.15细胞表面微绒毛消失,细胞器变少,核浆比例变小,核小体增多,细胞内可见病毒包涵体。HepG2.2.15细胞能稳定的分泌HBsAg、HBeAg和Dane颗粒。HepG2.2.15细胞增殖比HepG2细胞慢。HepG2.2.15和HepG2细胞中都有MTA1、MMP2和MMP9的表,MTA1主要表达于细胞核,MMP2和MMP9主要表达在胞浆,MTA1和MMP9在HepG2.2.15细胞中的表达水平明显低于HepG2细胞,MMP2在这两种细胞中的表达没有明显差异。
结论:稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞与其不表达HBV的母细胞HepG2相比,在形态结构上存在很多差异,这些形态上的差异影响HepG2.2.15细胞的运动、增殖能力,使得HepG2.2.15比HepG2细胞增殖的慢。HepG2.2.15与HepG2细胞的生长情况有明显差别。HepG2.2.15细胞适应期较长,对培养条件要求高。HepG2.2.15细胞适于抗HBV药物筛选方面的研究,但HepG2.2.15细胞MTA1、MMP9的表达降低,侵袭转移能力差,在用于抗癌症侵袭转移方面的研究时宜慎重。