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目的脓毒症时,体内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平明显升高,并对心脏产生负性肌力作用；而β3-肾上腺素能受体(p3-AR)表达亦明显增高,对心脏起负性肌力作用,与脓毒症心功能障碍有关。已有研究显示：TNF-a处理心肌细胞后,p-肾上腺素能受体(p-AR)(含β1-、p2-、β3-AR)正性肌力作用明显减低；而感染后,血中TNF-a的水平明显升高,加入TNF-a抑制剂可在一定程度上抑制心肌收缩力的下降。同时,有研究显示：全身感染的患者体内一氧化氮(NO)水平明显增加,TNF-a可刺激心脏组织合成释放NO,导致心肌受抑,并诱导心肌细胞凋亡,且可以降低心肌细胞p-肾上腺素能受体反应性；而抑制NO后,心肌正性肌力作用增强,可见NO参与p-AR系统的调节。因此,我们设想：TNF-a会上调心肌p3-AR而产生负性肌力作用,并抑制心肌收缩,导致心功能障碍；而NO会参与此过程,影响TNF-a对β3-AR的调节。方法1、取生后2天SD大鼠,麻醉,消毒,开胸,取心,冲洗,取心室肌,剪碎。用胰酶及胶原酶消化,收集上清离心,加培养基将沉淀吹打均匀,差速贴壁两次,去除成纤维细胞,将未贴壁的细胞悬液放入培养瓶,隔日换液。行心肌细胞鉴定。2、取第四天细胞进行实验：1)加入含不同浓度TNF-α的培养液；2)加含L-NAME及含1.6ng/mlTNF-a的培养液,作用12小时。然后,收取心肌细胞,待用。3、real-time RT-PCR检测心肌细胞β3-AR mRNA:按试剂盒说明操作提取总RNA；进行PCR扩增；根据荧光定量分析图,利用2-△△CT方法进行数据分析。4、Western blot检测心肌细胞p3-AR蛋白表达：蛋白提取及定量；SDS-PAGE蛋白电泳；进行转膜、封闭、抗体杂交；ELC发光结果心肌细胞受TNF-a刺激后,β3-AR mRNA及蛋白水平变化一致：1、随着TNF-α作用时间的延长、作用浓度的增加,心肌细胞β3-AR mRNA和蛋白的相对表达量增加,至作用浓度为1.6ng/ml,作用时间为12小时,其表达量达峰值,后逐步减少。2、TNF-α作用于心肌细胞,浓度为1.6ng/ml,时间为12小时,L-NAME作用后β3-AR较作用前明显降低,说明抑制NO合成后,p3-AR表达减少,也即NO参与TNF-α对心肌细胞β3-AR的表达的调节。结论1、心肌细胞在TNF-a作用下,β3-AR上调,且有时间及浓度依赖性。2、抑制NO合成可以抑制TNF-a所致的心肌细胞p3-AR上调。