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目的:研究OPS法玻璃化冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞的有效性和安全性,以期为人类卵母细胞的玻璃化冷冻奠定一定的实验基础.方法:一、初步观察OPS法玻璃化冷冻的有效性和卵丘颗粒细胞对冻存效果的影响.用OPS法玻璃化冷冻保存GV期卵丘—卵母细胞复合物177个、脱去颗粒细胞的裸卵181个,复苏后行体外成熟培养,观察并比较其成熟能力.新鲜GV期卵丘—卵母细胞复合物158个直接行体外成熟作为对照组.二、GV期卵丘—卵母细胞复合物共707个,随机分为4组:(1)OPS法冷冻保存GV期卵丘—卵母细胞复合物215个,复苏后行体外成熟、体外受精和胚胎的体外培养,观察OPS法玻璃化冷冻复苏后卵母细胞成熟、受精和胚胎的发育能力;(2)用玻璃化溶液EG5.5处理GV期卵丘—卵母细胞复合物128个但不予冷冻保存、(3)取GV期卵丘—卵母细胞复合物170个在室温下暴露20分钟,不予其他处理,之后行体外成熟、体外受精和胚胎的体外培养,观察玻璃化溶液EG5.5、室温对GV期卵母细胞成熟、受精和胚胎发育能力的影响:(4)取GV期卵194个直接行体外成熟,体外受精和胚胎培养,作为IVM对照组.取体内成熟的卵母细胞201个行体外受精、胚胎体外培养,作为in-vivo对照组.三、新鲜GV期卵丘—卵母细胞复合物、复苏后存活的GV期卵母细胞、新鲜GV卵体外成熟后的成熟卵母细胞、冷冻复苏后存活GV卵体外成熟后的成熟卵母细胞,用透射电子显微镜观察超微结构的变化.结论:GV期卵母细胞能耐受冷冻,复苏后可在体外发育成熟并能正常受精、卵裂,但受精、卵裂率较新鲜卵显著下降,胚胎发育能力欠佳.卵丘颗粒细胞不影响卵母细胞的存活率和成熟率.玻璃化溶液EG5.5及短暂的室温下暴露均不影响卵母细胞的成熟、受精、卵裂和胚胎发育.冷冻对卵母细胞的超微结构造成了一定程度的损伤.总之,未成熟卵母细胞用OPS法玻璃化冷冻可有效保存,但如何更好的保存未成熟卵母细胞和改善体外培养系统以提高卵母细胞的发育能力尚需深入研究.