【摘 要】
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土壤盐碱化是制约着我国林业发展的重要环境因子,通过基因工程改良杨树抗逆能力是经济有效的途径之一。b ZIP转录因子家族不参与植物生长发育、种子成熟等生物过程,还参与多种非生物胁迫的响应。有关b ZIP转录因子在杨树中的作用研究较少,本研究对PtrbZIP53基因耐盐胁迫的生物学功能进行研究。结果如下:（1）克隆出420bp的PtrbZIP53基因c DNA片段,包含完整的ORF,编码139个氨基酸
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土壤盐碱化是制约着我国林业发展的重要环境因子,通过基因工程改良杨树抗逆能力是经济有效的途径之一。b ZIP转录因子家族不参与植物生长发育、种子成熟等生物过程,还参与多种非生物胁迫的响应。有关b ZIP转录因子在杨树中的作用研究较少,本研究对PtrbZIP53基因耐盐胁迫的生物学功能进行研究。结果如下:（1）克隆出420bp的PtrbZIP53基因c DNA片段,包含完整的ORF,编码139个氨基酸;蛋白序列中含有高度保守的DNA结合碱性区域,属典型的b ZIP家族成员;亚细胞定位于细胞核中,具有转录激活活性,且转录激活区域位于蛋白C端。（2）用Na Cl、PEG 6000和ABA对毛果杨进行处理,利用荧光定量PCR检测PtrbZIP53基因表达水平,结果表明PtrbZIP53基因可以被盐、干旱和ABA胁迫诱导表达;PtrbZIP53基因在Na Cl处理12h后在根部的相对表达量达到最大值;在PEG6000和ABA处理后其表达趋势均为先上升后下降。（3）构建植物过表达载体,通过农杆菌介导法进行烟草遗传转化与毛果杨遗传转化,通过PCR和q RT-PCR技术对得到的转基因株系进行验证,成功获得烟草转基因株系与毛果杨转基因株系。（4）用不同浓度Na Cl处理烟草种子,结果表明转基因烟草种子发芽率显著高于野生型烟草。随着盐胁迫处理时间的延长,转基因烟草的生长状态明显好于野生型烟草,且转基因烟草鲜重和干重分别比野生型烟草高9.73%～16.85%和6.89%～11.17%,说明过表达PtrbZIP53基因可以提高烟草的耐盐性。（5）通过观察转基因与野生型毛果杨形态发现,转基因植株地上部分的生长出现矮化现象,地下部分比于野生型具有更多的侧枝。（6）利用Na Cl处理过表达PtrbZIP53转基因毛果杨和野生型毛果杨,组织化学染色结果表明,过表达PtrbZIP53转基因毛果杨根尖部位Evans Blue、NBT和DAB染色均比野生型浅。过表达PtrbZIP53转基因毛果杨SOD、POD和CAT活性分别比野生型提升15.94%、18.21%和26.73%,Pro含量比野生型增加20.49%,MDA含量下降18.37%,表明过表达PtrbZIP53可以提高毛果杨耐盐能力。
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