产抑李斯特细菌素乳酸菌的筛选及其细菌素的研究

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:my2002hhl
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单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)是一种适应性很强的、能引起严重的食源性疾病的致病菌,可引起脑膜炎、败血症和流产。乳酸菌细菌素是一种由乳酸菌代谢产生的有杀菌或抑菌作用的小分子肽或蛋白质类物质,具有高效、无毒、无残留、不产生耐药性等特点,已经成为食品防腐剂研究重点,同时被认为是最有希望代替抗生素的天然产物。采用双层琼脂扩散法,以L. monocytogenes为指示菌,在排除过氧化氢和有机酸的基础上,从传统发酵酸黄瓜中分离的200株乳酸菌中筛选到一株发酵上清液对指示菌有抑制作用的菌株ZLG85。通过胃蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶降解实验,确定了抑菌物质的细菌素本质。通过形态、生理生化实验和16S rDNA序列分析,将菌株ZLG85鉴定为肠膜明串珠菌肠膜亚种。对肠膜明串珠菌素ZLG85(Mesentericin ZLG85)进行了分离纯化及分子量测定。采用80%体积比的冷乙醇沉淀进行细菌素粗提取。使用葡聚糖凝胶Sephadex G-25对细菌素进行凝胶层析,上样量3mL,洗脱剂洗脱速度0.8mL/min。纯化后,细菌素纯化倍数为25.37,效价为60185AU/mL。通过N-羟甲基甲基甘氨酸(Tricine)-SDS-PAGE凝胶电泳测得细菌素的分子量为2.5kDa。对Mesentericin ZLG85的抗菌谱进行研究,结果表明mesentericin ZLG85除了能较好的抑制L. monocytogenes的生长外,还能抑制金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌、枯草芽孢杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌等的生长。Mesentericin ZLG85具有良好的热稳定性,较强的酸碱稳定性,对木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶以及胰蛋白酶均很敏感,K+、Na+、Mg2+、Ca2+、Zn2+对其抑菌活性影响显著(P<0.05),有机溶剂对其活性的影响不显著(P>0.05)。Mesentericin ZLG85的分子量和抗菌谱不同于目前已知的明串珠菌素,是一种新型广谱的肠膜明串珠菌素。
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