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mi RNAs是一类进化上保守的内源性非编码小分子RNA,通过种子序列识别靶mRNA,并与其结合,通过降低靶mRNA的稳定性或抑制蛋白质翻译来发挥作用。研究表明,骨骼肌的发育及相关疾病的形成都有miRNAs的广泛参与。因此,以C2C12为细胞模型,研究miRNAs对骨骼肌的作用,可以为后期的研究提供理论基础。目前,关于miR-145的研究大多集中在肿瘤上,但其在骨骼肌上的功能还未见报道。为探明mi R-145在C2C12成肌细胞增殖过程中的作用,本研究采用real-time PCR检测了mi R-145在C2C12成肌细胞增殖过程中的表达;通过超表达miR-145、siRNA干扰FSCN1基因的表达、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色和MTT比色法检测C2C12细胞的增殖分裂,研究了miR-145对C2C12成绩细胞增殖的调控作用及其机理。主要结果如下:1.MiR-145的表达分析。在细胞增殖24h,48h和24h后无血清培养基培养24h收集细胞,提取细胞总RNA进行表达分析采用real-time PCR方法,检测不同阶段miR-145的表达变化,用U6作为内参。与生长中的细胞相比,饥饿显著上调了C2C12细胞中mi R-145的表达(*P<0.5)。2.MiR-145抑制C2C12成肌细胞的增殖。细胞在转染模拟物与阴性对照24h后利用EdU试剂盒检测细胞增殖情况,与对照组相比,视野中红色荧光要少于对照组,经统计分析,模拟物转染组的细胞EdU阳性细胞率为43.58%±1.6%,要显著的低于对照组的阳性率53.38%±0.60%(*P<0.05)。同样,在细胞在转染模拟物与阴性对照24h后用MTT法检测细胞增殖情况,结果显示,mi R-145模拟物转染组OD值显著低于阴性对照组(*P<0.05)。3.MiR-145靶基因的确定。利用生物在线软件TargetScan等分析预测小鼠miR-145的靶基因,均预测FSCN1为mi R-145的靶基因。将成肌细胞C2C12转染miR-145 mimics,在转染处理24h之后收集细胞RNA和蛋白,检测靶基因FSCN1的表达情况。与对照相比,处理组FSCN1 mRNA水平下降了约50%左右。处理组FSCN1蛋白出现极显著降低,灰度分析显示miR-145处理组蛋白水平相较于对照组下降了约25%,FSCN1小干扰RNA组的蛋白水平下降了超过50%。4.FSCN1抑制成肌细胞C2C12的增殖。将siRNA与转染试剂在常温下混合20min后加培养基转染24h,之后提取RNA,检测转染之后的干扰效率,转染后的FSCN1的mRNA表达水平约为30%,蛋白的表达水平约为40%,差异显著。利用EdU试剂盒检测细胞增殖情况与对照组相比,模拟物转染组的细胞EdU阳性细胞率为34.49%±1.29%,要显著的低于对照组的阳性率43.21%±0.66%(*P<0.05)。同样的,在细胞在转染FSCN1小干扰RNA与阴性对照24h后进行利用MTT法检测细胞增殖情况,经数据分析后,结果显示,FSCN1转染组OD值显著低于阴性对照组(*P<0.05)。以上研究结果表明,miR-145通过抑制靶基因FSCN1的表达来抑制成肌细胞C2C12的分裂增殖。miR-145在肌肉干细胞中的作用未见报道,本研究具有创新性。