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目的:本研究主要目的是探讨中国天津地区人群APOE启动子-219G/T、-427T/C、-491A/T位点基因多态性、血浆血脂蛋白、血清载脂蛋白E含量水平与冠心病发病危险性之间的关系;采用荧光报告基因的方法,探讨-427T/C启动子部位基因变异对APOE基因转录的影响;对连续服用3个月他汀类药物后,对APOE-219G/T、-427T/C、-491A/T不同基因多态性的CHD患者的血浆脂蛋白的调节作用,为我国冠心病遗传学基础提供理论依据,进一步为冠心病患者提供理论依据更充分及更精准的个性化治疗。方法:1.APOE启动子-219G/T、-427T/C、-491A/T基因变异与血浆脂蛋白水平和冠心病患病的关系:采用病例对照研究,受试者选取天津地区汉族人群,来自2015年10月～2016年9月在天津市胸科医院心内科住院的患者,入院后他们接受相关的化验检查及心脏血管介入检查,根据最终造影情况分成两组,冠心病组、正常对照组。使用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,分析APOE-219G/T、-427T/C、-491A/T基因型,同时采用ELISA方法测定其血清APOE的含量,分析APOE-219G/T、-427T/C、-491A/T基因遗传多态性、血清的载脂蛋白E含量、血浆脂蛋白代谢及冠心病风险之间的关系。2.APOE启动子-427T/C基因突变对细胞DNA除启动子部位以外的下游基因表达转录活性的影响:根据结果,-427T/C位点C等位基因携带者为冠心病的危险因素,且实验结果显示C等位基因携带者载脂蛋白E含量较T等位基因携带者载脂蛋白E含量有下降趋势,考虑这是影响冠心病及血脂的可能途径,故我们仅选择-427TT和-427CC纯合子基因,通过PCR扩增该启动子区域-342bp～-580bp基因片段。纯化测序后,将该片段与pGL2-Basic质粒通过酶切及连接酶相连接,构建pGL2-APOE/-427TT和pGL2-APOE/-427CC重组质粒,经过测序验证连接正确后,经阳离子脂质体介导的转染法将合成连接的重组质粒导入到293T细胞,收集细胞,测定荧光素酶报告基因在细胞中的强度,计算携带不同基因型的重组质粒各自荧光素酶的相对活性,经过统计分析,最终得出APOE不同基因型对转录活性的不同影响。3.含有APOE-219G/T、-427T/C、-491A/T启动子部位三个位点基因多态性检测后,随访所有冠心病患者,这些患者均连续服用阿托伐他汀钙每晚一次20mg。服用12周后,门诊复查化验血脂,观察不同APOE启动子-219G/T、-427T/C、-491A/T基因型与阿托伐他汀钙调节血脂作用的关系。结果:1.冠心病组和对照组一般资料比较,2组年龄差异有统计学意义,冠心病组年龄显著高于对照组;2组男性比例有差异,具有统计学意义。冠心病组男性比例显著高于对照组;在CHD组中,血清TG、LP(a)水平显著高于对照组;血清HDL、APOAI水平显著低于对照组,差异均由统计学意义。2.比较所有研究对象的不同基因型(-219GG/-219GT+TT、-427TT/-427TC+CC、-491AA/-491AT+TT)之间血脂和载脂蛋白的差异,可见对照组中-219位点GT+TT基因型与GG基因型相比,TC、LDL-C、APOA、HDL-C水平升高有统计学差异;可见冠心病组-427位点TC+CC基因型与TT基因型相比,APOB浓度升高,差异有统计学意义;对照组-427位点,TC+CC基因型与TT基因型相比APOB浓度升高,差异具有统计学意义;可见冠心病组中-491AT+TT基因型与AA基因型相比ApoA/B比值有统计学差异,其余TC、TG、HDL-C等血脂均无统计学差异,对照组中各血脂及载脂蛋白均无统计学差异。3.-219T等位基因频率在冠心病组是0.268,在对照组为0.288;-427C等位基因频率在冠心病组是0.211,在对照组是0.098;-491T等位基因频率在冠心病组是0.053,在对照组是0.074,以上频率与国外报道均有差异。4.-427C等位基因频率在冠心病组显著高于对照组,分布具有统计学差异。多因素Logistic回归分析显示-427C是冠心病的危险因素。5.比较APOE启动子-219G/T、-491A/T位点对冠心病和对照组中APOE浓度的影响,发现两个位点的基因多态性之间APOE浓度并无统计学差异;同样-427T/C位点TC+CC基因型与TT基因型相比,APOE浓度虽有升高趋势,亦无统计学差异。6.转染pGL2-APOE/-427TT的293T细胞中荧光素酶的相对活性显著高于pGL2-APOE/-427CC的活性(P<0.05),由此可证明,T等位基因携带者的载脂蛋白E转录活性比C等位基因携带者的转录活性升高,差异有统计学意义。7.冠心病患者服用阿托伐他汀钙后,血浆脂质水平与APOE基因多态性相关,-219位点GT+TT基因型组与GG基因型组相比调脂治疗前后血脂水平变化率无统计学差异;-427位点TC+CC基因型组与TT基因型组治疗前后血脂水平变化率比较可见,TC+CC基因型组TC、LDL降低更明显,差异具有统计学意义;-491位点AT+TT基因型组与AA基因型组相比调脂治疗前后血脂水平变化率无统计学差异。结论:1.APOE启动子-427C等位基因携带者是冠心病的危险因素。2.报告基因实验结果显示:在体外细胞,携带变异性C等位基因的转录活性明显比携带野生T等位基因者活性减低,APOE启动子-427T/C位点是调节APOE启动子转录活性并影响血清APOE浓度的功能性位点。3.APOE基因-427C等位基因携带者对阿托伐他汀钙调脂效果更敏感。