松江鲈(Trachidermus fasciatus)为中国“四大名鱼”之一,具有较高的经济价值和营养价值。其成年个体一般体长12～17cm,体重50～100g,为肉食性的小型降海溯河洄游性鱼类。松江鲈以往主要分布在我国的渤海、黄海和东海沿岸及沿海河流的下游,但是,近十几年来随着我国经济的迅速发展,自然环境受到了较大破坏,特别是大多数工厂沿河流排污。而松江鲈依赖于江河的入海口进行生长和繁殖,这无疑大大压缩了它们的生存空间,据目前的资料来看,现仅分布在鸭绿江、青龙河以及富春江流域。所以,松江鲈已经被列入国家二级保护动物；同时,我国于2007年1月在山东省文登市埠口镇的青龙河出海口处建立了首个松江鲈自然保护区,本实验所用松江鲈即采自此保护区。组织蛋白酶是一种水解酶,可以降解蛋白质或者多肽片段,使其从氨基酸与氨基酸之间的肽键处断裂或者专一性的在氨基酸侧链处断裂。“组织蛋白酶”的概念在20世纪20年代提出,关于它的研究则在以后的近一个世纪中迅速发展,到现在为止,已经发现了几十个种类的组织蛋白酶。组织蛋白酶广泛分布于细菌、植物和动物中,是新陈代谢中必不可少的酶,它的生物学功能很多,比如参与免疫应答、降解不需要的蛋白质以维持内稳态、在消化道内消化食物以及降解卵黄蛋白供给胚胎发育等等,本论文重点研究了其在松江鲈体内的免疫应答作用,获得了两个重要的组织蛋白酶的cDNA序列,并以此为基础构建了原核表达载体,表达并纯化了它们的蛋白；另外,还利用qRT-PCR技术测得了两种组织蛋白酶在正常情况下和鳗弧菌刺激后在肝脏、鳃、血液和脾脏中的表达模式,并对此进行了分析,推断这两种酶参与了松江鲈免疫应答的过程。本论文获得了松江鲈的Cathepsin B和Cathepsin L的核苷酸序列。CathepsinB的cDNA序列全长为1226bp,5’端非编码区118bp,3’端非编码区115bp,有多聚腺苷酸(polyA)尾巴和加尾信号(AATAA),开放阅读框为993bp,编码330个氨基酸,氨基酸序列的N端有一个18个氨基酸的信号肽,成熟肽中含有-Cathepsin B的特有功能区域Occluding loop(含有21个氨基酸残基)；CathepsinL的cDNA序列全长为1404bp,5’端非编码区53bp,3’端非编码区340bp,也有多聚腺苷酸(polyA)尾巴和加尾信号(AATAA),开放阅读框为1011bp,编码336个氨基酸,N端有一个16个氨基酸的信号肽,氨基酸序列中含有Inhibitor_I29区域,并发现了一段基序ERF/WNIN和一个EF handCa2+结合区域,推断Cathepsin L应当属于一种钙调蛋白。运用β-actin基因作为内参并利用qRT-PCR技术测得分析了松江鲈Cathepsin B和Cathepsin L的表达模式,这两种蛋白酶的mRNA在血、心、肝、鳃、肠、皮、肾、脾、脑和卵都有表达,说明它们广泛分布于各个器官组织内,是生命活动不可缺少的酶。另外,本论文还检测了肝、鳃、血和脾在1h、2h、6h、12h、24h、48h和72h共七个时间点的相对表达量,发现经过鳗弧菌刺激后,绝大多数都在1h、2h处显著上调,预示着CathepsinB和Cathepsin L极有可能参与了松江鲈的免疫应答,可能是这一机制中的关键酶。本论文的研究认为,松江鲈的Cathepsin B和Cathepsin L也像其他被研究的动物一样,是一种免疫相关酶。这两种酶cDNA序列的获得、蛋白质结构的分析和功能的预测以及表达模式的讨论,可以为松江鲈的病害防治和人工驯养提供第一手的资料。