杜仲叶提取物制备工艺及质量标准研究

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杜仲、杜仲叶为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的干燥树皮和干燥叶,是我国特有的贵重中药材,主要分布在贵州、陕西、四川等地。二者均收载于《中国药典》(2010年版一部),现代研究发现,杜仲叶和杜仲树皮具有相似的化学成分和功效,具有补肝肾、强筋骨、安胎的功能。本文的研究成果如下:一、比较加热回流提取法、超声波提取法、闪式提取法三种提取方法提取杜仲叶中有效成分的效果,用RP-HPLC法测定杜仲叶中有效成分的含量。色谱柱:Thermo Hypersil Gold C18(250mm×4.6mm,5μm);以甲醇-水-冰醋酸(15:85:1)为流动相;流速1.0mL/min;检测波长为237nm。结果:用闪式提取法时杜仲叶中绿原酸的含量最高;用加热回流法时京尼平苷酸的含量最高;加热回流法、超声波法、闪式提取法绿原酸的含量分别为1.63%、1.68%、1.76%;京尼平苷酸的含量分别为0.58%、0.59%、0.60%。二、用闪式提取法确定了杜仲叶提取物的最佳提取工艺。采用单因素实验考察,以绿原酸和京尼平苷酸为评价指标,确定了以70%乙醇为提取溶剂;采用提取次数、提取时间、料液比、乙醇浓度的四因素三水平正交实验,优选出杜仲叶提取物的最佳提取工艺为:70%乙醇提取3次,提取时间为6mmin,料液比为1:25,滤过,合并滤液,减压浓缩成相对密度为1.05-1.10的清膏,喷雾干燥,即得杜仲叶提取物。三、制订了杜仲叶提取物的质量标准。建立了以绿原酸为对照品的薄层色谱鉴别方法;考察了杜仲叶提取物的水分、重金属等检查项目;建立了杜仲叶提取物的HPLC指纹图谱,色谱柱:Thermo Hypersil Gold C18(250mm×4.6mm);以甲醇0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;柱温25℃;流速1.0mL/min;检测波长254nm;检测时间为75min。在此条件下,分别对不同采收时期的杜仲叶提取物的指纹图谱进行评价,生成对照指纹图谱,确定了19个共有特征峰,并对其中主要的有效成分绿原酸、京尼平苷酸的含量进行测定。本文采用闪式提取法对杜仲叶提取工艺进行优化、制备了杜仲叶提取物及质量标准的研究,结果表明:工艺合理,质量控制的方法先进,提取物质量稳定,为该提取物的进一步研究提供了实验基础。
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