茄属中草药天茄籽和白英抗H5N1病毒活性成分研究

来源 :北京工业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:cds123
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禽流感是由流感病毒引起的禽类发病的统称。目前高致病性禽流感(HPAI)已经突破种间障碍可以直接威胁感染人类,且尚无特效治疗药物。从天然药物中寻找高效低毒的先导化合物是发现并研制抗禽流感药物的一条有效途径。本论文选择A/Tiger/Harbin/01/2002(HAB/01)H5N1病毒株感染的MDCK细胞为活性筛选模型,以细胞病变法(CPE)为初步筛选的活性评价方法。首次发天茄籽和白英提取物具有显著的抗H5N1病毒的活性。本论文对天茄籽和白英提取物的活性部位进行了深入的化学成分研究,对分离得到的单体化合物进行细胞体外抗H5N1病毒活性筛选和活性化合物的动物体内活性实验,为抗禽流感药物的研制与开发奠定基础。本论文通过AB-8型大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、C18反相柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱和PHPLC等手段进行分离纯化,从天茄籽中分离得到65个单体化合物,通过理化常数测定,MS、1D和2D NMR(1H、13C、1H-1HCOSY、HSQC、HMBC、NOE、CD)等波谱分析方法,鉴定了其中60个化合物的结构,其中有新化合物17个,鉴定的60个化合物分别为:indicumine F(1),indicumineG(2),indicumine H(3),indicumine I(4),indicumine J(5),7-羟基-β-咔啉-1-丙酸甲酯(6),10-oxo-N-trans-feruloyl tryptamine(7),10-羰基-N-反式阿魏酰-5-羟基色胺(8),indicumineA(9),indicumine B(10),indicumine C(11),indicumine D(12),indicumine E(13),7-羟基-6,8-二甲氧基-3-(4’-羟基-3’-甲氧基)香豆素(14),7-羟基-1-羰基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉(15),indicumine K1(16),indicumine K2(17),N-反式阿魏酰酪胺(18),tribulusamideA(19),flavumindole(3a)(20),7-羟基-1-(4-羟基-3-甲氧基苯)-N2,N3-二(4-羟基-苯乙基)-6-甲氧基-1,2-二氢化萘-2,3-二咪唑羧酸胺(21),thoreliamide C(22),erythro-canabisine H(23),hyoscyamide(24),grossamide K(25),N-trans-feruloyl tryptamine(26),moschamine(27),arenarine D(28),7-hydroxy-3,4-dihydro-1-oxo-β-carboline(29),aervin(30),3-吲哚醛(31),3-吲哚酸(32),3-羟基-2-苯基丙酰胺(33),isofraxidin(34),scopoletin(35),fraxino(l36),5,7-二羟基-6-甲氧基香豆素(37),arteminorinA(38),arteminorin B(39),4,4’-biisofraxidin(40),cleomiscosin A(41),medioresinol(42),香草酸(43),香草醛(44),阿魏酸乙酯(45),染料木素(46),染料木苷(47),大叶茜草素(48),山奈酚(49),6"-O-乙酰基染料木苷(50),munjistine(51),α-D-半乳糖乙苷(52),1,3–dihydroxyanthraquinone(53),C16酸(54),曼陀罗萜二醇(55),曼陀罗萜醇酮(56),hyoscyamilactol(57),larnaxolide A(58),β-谷甾醇(59),胡萝卜苷(60),化合物1至17为17个新化合物(包括9个酰胺和吲哚类,其中1至3为新骨架类化合物,6个香豆素类,2个木脂素类),化合物20、22~30、33、38~41共15个化合物首次从该属分离得到;化合物19、21、31~32、35~37、42~60共26个化合物首次从该植物中分离得到;从白英活性部位中分离并鉴定了14个单体化合物,结构分别为:lyratoside A(1),lyratoside B(2),lyratoside C(3),lyratoside D(4),lyratoside E(5),lyratosideF(6),lyratoside G(7),(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-呋甾-3β,22,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(8),(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-呋甾-3β,22,26-三醇-3-O-β-D-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯(9),pallidifoside B(10),茄碱啶(11),胆甾醇(12),豆甾-3,7-二酮(13),4-(2,6-Dimethylbenzyl)-5,5-dimethyl-dihydro-2(3H)-furanone(14),化合物1至7为7个新化合物(包括2个甾体生物碱,5个甾体皂苷类),化合物8~14为首次从该植物中分离得到。从天茄籽中分离得到一系列酰胺类、吲哚类和香豆素类化合物,包括15个吲哚类,10个酰胺类和14个香豆素类,其中新化合物15个,丰富了该种植物的化学成分,特别是为植物化学丰富了香豆素骈木脂素酰胺类这一新生源途径;增添indicumine F(1),indicumine G(2),indicumine H(3)三个新颖骨架类化合物;从白英中分离得到7个新化合物(lyratoside A-G),3位糖链多为β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖,其中lyratoside D为首次从茄属中分离到该母核。单体化合物细胞体外抗H5N1病毒活性评价结果显示X,Y,munjistine(51),山奈酚(49),吲哚酸(32)有显著的抗H5N1病毒活性,药物浓度分别为1.2μg/mL,2.4μg/mL,18.75μg/mL,37.5μg/mL和150μg/mL时,CPE结果为一个“++”,可能是天茄籽和白英抗H5N1病毒的主要活性成分之一。体内活性试验表明,与阴性空白对照组相比,化合物X能够延长BABL/c小鼠1~2天的存活时间,具有进一步研究的价值,有望成为抗禽流感药物研究的新的先导化合物。
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