目的:本实验旨在研究H₂O₂诱导大鼠AECⅡ凋亡中MDM2基因的表达情况,探讨MDM2基因对H₂O₂诱导的AECⅡ凋亡的影响以及调控凋亡的机制。方法:健康雄性SD大鼠AECⅡ经分离、纯化、培养48h后,随机分为7组进行模型构建:A组（正常对照组:直接培养）,B组（H₂O₂组:0.5mmol/L H₂O₂）,C组（Empty vector组:慢病毒空载体感染）,D组（MDM2组:MDM2慢病毒过表达载体感染）,E组（MDM2-shRNA组:MDM2慢病毒沉默载体感染）,F组（MDM2+H₂O₂组:MDM2慢病毒过表达载体感染+0.5mmol/L H₂O₂）,G组（MDM2-shRNA+H₂O₂组:MDM2慢病毒沉默载体感染+0.5mmol/L H₂O₂）。倒置相差显微镜观察AECⅡ生长形态、密度;透射电子显微镜（TEM）观察特征性结构鉴定AECⅡ;CCK-8检测AECⅡ增殖活力;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测MDM2 mRNA的表达水平;流式细胞术（FCM）检测纯度和凋亡率;线粒体膜电位（MMP）检测早期凋亡率;免疫共沉淀（CO-IP）验证MDM2和p53蛋白的相互作用关系;免疫荧光染色（IF）通过荧光显微镜观察MDM2蛋白的表达;蛋白印迹法（Western blot）检测MDM2、p53、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3蛋白的表达水平。结果:1.细胞形态:光镜观察AECⅡ24h开始贴壁,48h贴壁率达95%以上;透射电子显微镜观察到AECⅡ特异性的微绒毛及嗜锇板层小体,流式细胞仪检测AECⅡ纯度为91.75%±0.74%。2.H₂O₂诱导的AECⅡ中存在MDM2的低表达:48h时间点,与A组相比,B组MDM2mRNA及蛋白表达水平下降（P<0.05）。3.模型鉴定:48h时间点,与A组相比,D组MDM2 mRNA表达水平增高,E组MDM2mRNA表达水平降低（P<0.05）。4.CCK-8:24h、48h时间点,与A组相比,B、E组增殖能力降低,D组AECⅡ增殖能力增高（P<0.05）,各组中D组增殖能力最强,G组增殖能力最弱。5.凋亡率:24h、48h时间点:与A组相比,B组凋亡率升高（P<0.05）;与C组相比,D组凋亡率降低,E组凋亡率增高（P<0.05）;与B组相比,F组凋亡率降低,G组凋亡率增高（P<0.05）;各组间D组凋亡率最低,G组凋亡率最高。6.线粒体膜电位:48h时间点,与A组相比,B组早期凋亡率增高（P<0.05）;与B组相比,G组早期凋亡率增高（P<0.05）。7.CO-IP:CO-IP验证结果显示MDM2与p53蛋白之间存在结合关系。8.线粒体凋亡途径相关蛋白检测:48h时间点,与C组相比,D组MDM2蛋白表达水平增高,p53、Bax/Bcl-2、cleaved-caspase3蛋白水平降低;E组MDM2蛋白表达水平降低,p53、Bax/Bcl-2、cleaved-caspase3蛋白水平增高（P<0.05）;结论:1.MDM2可通过p53抑制H₂O₂诱导AECⅡ凋亡。2.MDM2抑制AECⅡ凋亡的机制之一是通过线粒体凋亡通路途径上调Bcl-2蛋白及下调Bax、cleaved-caspase3蛋白表达水平实现的。