论文部分内容阅读
目的：(1)建立耐药性稳定的耐5-FU人结肠癌细胞株HCT-8/5-FU裸鼠移植瘤动物模型,探讨膈下逐瘀汤逆转裸鼠移植瘤MDR-1基因的表达；(2)研究膈下逐瘀汤对复发、转移大肠癌患者MDR-1基因表达的临床研究,为逆转肿瘤耐药的研究提供理论依据。方法：(1)体外常规培养HCT-8、HCT-8/5-FU细胞,MTT法检测HCT-8、HCT-8/5-FU肿瘤细胞对四类作用机制不同的化疗药物的耐药性(5-FU、VCR、VP-16、DDP)。取对数生长期细胞HCT-8. HCT-8/5-FU接种于裸鼠右腋下,待瘤体平均体积至100mm3,将已成瘤并维持耐药性的裸鼠随机分为四组：对照组、膈下逐瘀汤组、5-FU组、膈下逐瘀汤+5-FU组。每隔2天测量肿瘤最长径(a)及最短径(b),计算肿瘤体积；连续给药14天后,处死裸鼠,取瘤组织,称瘤重。RT-PCR分别检测瘤组织内MDR-1mRNA表达。(2)采用随机对照实验研究方法将50例符合纳入标准的复发、转移的晚期大肠癌患者分为2组,一组予FOLFOX4方案化疗(单纯化疗对照组)4周期,一组FOLFOX4方案化疗加膈下逐瘀汤(治疗组)4周期。分别在化疗前及化疗后采集外周血2mL。 RT-PCR法,检测外周血MDR-1mRNA表达。结果在SPSS16.0软件中进行统计学分析。结果：1.MTT法检测人结肠腺癌细胞HCT-8/5-FU对5-FU、DDP、VCR、VP-16的耐药倍数为120.94±6.9、11.47±0.13、11.74+0.2、21.11±0.60。差异有统计学意义(P<0.05),表明耐药细胞对其他机制不同、结构各异的化疗药均有不同程度交叉耐药性。取HCT-8、HCT-8/5-FU两组瘤组织检测其耐药性,结果5-FU对HCT-8、HCT-8/5-FU两组瘤组织的IC50分别为0.26±0.12umol/L.26.56±0.23umol/L,耐药倍数为98.30±3.56,较体外细胞培养耐药倍数略有下降,但仍保持着良好的耐药性。2.人结肠腺癌HCT-8移植瘤成瘤率为71.42%(5/7),而HCT-8/5-FU耐药细胞成瘤率为88.23%(30/34),耐药细胞与敏感细胞成瘤率无明显差别(P>0.05)。3.根据移植瘤体积生长曲线大体表明,膈下逐瘀汤组、5-FU联合膈下逐瘀汤组瘤体生长速度慢于空白对照组和5-FU组,5-FU联合膈下逐瘀汤组与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。5-FU联合膈下逐瘀汤组、膈下逐瘀汤组、5-FU组对裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为18.0%、9.6%和7.0%,瘤体重量分别为(2.88±0.31)g、(3.17±0.53)g和(3.26±0.26)g,统计结果显示5-FU联合膈下逐瘀汤组抑瘤率明显低于空白对照组(P<0.03),提示两药联合对裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用。但单药5-FU组、膈下逐瘀汤与空白对照组比较差异无统计学意义,考虑与药物干预时间不足有关(P>0.05)。4.膈下逐瘀汤组MDR1mRNA的表达水平较对照组显著下调,联合用药组MDR1mRNA的表达水平下调更为明显,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。5-FU组MDR1mRNA的表达与对照组比较无差异(P＞0.05)。结果表明膈下逐瘀汤具有逆转裸鼠移植瘤MDR-1基因的表达。6.单纯化疗组化疗前外周血的MDR1阳性表达是76%,化疗后MDR1阳性表达是84%,化疗后较化疗前增高,表明化疗后复发转移的大肠癌患者的MDR1表达有增高趋势,提示存在化疗后的获得性继发耐药。7.中药联合化疗组化疗前外周血的MDR1表达是68%,化疗后MDR1表达是40%,化疗较化疗前降低,MDR1表达差异有统计学意义(P<0.05),表明膈下逐瘀汤具有逆转肿瘤原发耐药和继发耐药有关。结论：1.肿瘤细胞对一种化疗药物产生耐药性后,对从未接触过的、结构机制不同的多种抗肿瘤药物也具有交叉耐药性；2.人结肠腺癌HCT-8/5-FU皮下移植是建立多药耐药裸鼠移植瘤的良好方法,具有操作简单、成瘤率较高、耐药特性稳定等优点；3.膈下逐瘀汤可逆转裸鼠移植瘤多药耐药,其机制可能为通过下调MDR-1基因表达达到逆转效果；4.反复多程化疗后外周血MDR-1mRNA表达升高,恶性肿瘤的耐药性增加,可能与化疗后获得性继发耐药有关；5.膈下逐瘀汤能够降低复发转移大肠癌患者多药耐药基因MDR-1的表达,联合膈下逐瘀汤可提高临床化疗的有效率。