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目的:以CXCR4为靶基因,采用CRISPR/Cas9技术构建可诱导表达基因编辑慢病毒载体系统,并且在MKN-45细胞系验证其基因编辑功能。方法:分别以lenti-cas9-BLAST和PX458质粒为模板,扩增Blasticidin s及T2A-GFP基因片段,凝胶电泳回收后与Lenti-guide-puro质粒重组,获得重组质粒Lenti-guide-BLAST-GFP。针对CXCR4基因EXON2设计并合成三条sg RNA,与Lenti-guide-BLAST-GFP重组获得Lenti-guide-BLAST-GFP-sgRNA质粒,扩增后进行慢病毒载体包装。对pCW-Cas9质粒扩增后进行慢病毒包装。然后将上述两种载体依次感染MKN45细胞,压力筛选培养,经DOX 1μg/ml诱导后,检测MKN-45细胞CXCR4蛋白表达和基因突变水平,并验证CXCR4基因编辑前后MKN-45细胞对SDF-1应答改变。结果:经过测序证实,成功构建了Lenti-guide-BLAST-GFP和Lenti-guide-BLAST-GFP-sgRNA质粒,并成功获得Lenti-guide-BLAST-GFP和Lenti-guide-BLAST-GFP-sgRNA两种慢病毒载体。MKN-45细胞经过上述慢病毒载体感染及筛选后,经DOX诱导,T7E1实验证实gRNA-1,gRNA-2以及gRNA-3对CXCR4基因编辑效率分别为45.6%,53.6%,and 56.7%。Western blotting实验证实CXCR4蛋白表达明显减低;transwell迁移实验证实,MNK-45细胞对SDF-1应答能力减弱,与空白对照平均每高倍镜视野(400×)36.13±2.00个细胞相比,三条gRNA编辑后细胞,迁移至下室细胞分别为30.03±0.23,29.73±1.55,28.20±1.11(P<0.05)。结论:本研究成功构建了以CXCR4为靶基因,可诱导表达CRISPR/Cas9的慢病毒双载体基因编辑系统。