【摘 要】
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第一部分、AVP调控基因的新途径 AVP是精氨酸加压素在脑内的天然酶解产物,具有促进学习记忆的功能,它能在大鼠脑内引起一系列生理生化反尖,RT-PCR结合Southern杂交结果表明,A
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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第一部分、AVP<,4-8>调控基因的新途径 AVP<,4-8>是精氨酸加压素在脑内的天然酶解产物,具有促进学习记忆的功能,它能在大鼠脑内引起一系列生理生化反尖,RT-PCR结合Southern杂交结果表明,AVP<,4-8>能提高大鼠海马神经元内CTP：磷酸胆碱胞苷转移酶（CCT）的mRNA水平,以及大鼠海马胶质细胞中c-fos的mRNA水平.其拮抗剂ZDC（C）PR能够抑制这一作用.用放线菌素D中止细胞mRNA合成后发现,AVP<,4-8>能提高CCT mRNA和c-fos mRNA的稳定性.这提示转录后水平的调控是AVP<,4-8>影响一些基因mRNA水平的重要手段.第二部分、CCTβ在昆虫细胞中的表达和功能研究 利用Baculovirus病毒表达系统,在昆虫细胞Tn中大量表达大鼠CCTβ异构体蛋白.利用合适的供体质粒在蛋白N端加上6His-Tag,并形成重组的Bacmid病毒.重组病毒感染的Tn昆虫细胞内,外源基因扩增并表达融合蛋白,酶活性测定实验表明其活性达到了35.7±1.6nmol/mg/min,是天然脑内CCT活性的10<4>倍.与天然CCT特性相同,CCT的抑制剂HexPC能显著抑制表达的CCTβ的活性;Zn<2+>,和PO<,4><3->离子对CCTβ的活性也有抑制作用,在底物特异性方面,dCTP与CTP一样,是CCTβ的最适底物.此外,表达CCTβ的Tn细胞比天然Tn细胞胞内的CDP-胆碱合成的速度有明显提高.
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