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细胞周期进程和凋亡控制被认为是在保持细胞数量动态平衡和组织形态发生中密切关联的过程，凋亡抑制对肿瘤发生和发展极其重要。1997年Ambrosini等用效应细胞蛋白酶受体1(Effector Cell Protease Receptor-1，EPR1)探针与人类基因组文库杂交，分离到了一编码凋亡抑制蛋白的cDNA，定义为survivin。Survivin作为凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis proteins，IAP)的新成员因其独特的分子结构和生物学功能在肿瘤分子生物学研究中倍受关注。近来多项研究表明survivin不仅抑制凋亡，也参与细胞有丝分裂、加速肿瘤细胞增殖，在细胞凋亡和细胞周期的基因调控中发挥重要作用。但survivin基因在肺癌发生中的作用及作用途径报道甚少且存在争议。肺癌系世界上发病率最高的恶性肿瘤之一，但目前肿瘤的生物学行为无明确指标，本研究用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测了32例肺癌组织，10例病灶旁正常肺组织survivin mRNA、caspase-3 mRNA，caspase-7 mRNA表达的表达并进等相关性分析，以探讨survivin基因在肺癌发病机制中的作用，及其与caspase-3、caspase-7表达的相互关系，为今后以survivin基因为靶器对肺癌进行基因治疗提供理论依据。材料与方法一、材料RT-PCR实验组收集2006-2007年202医院，省肿瘤医院手术切除并经病理证实的NSCLC标本32例，男性26例，女性6例，平均年龄55.78岁(年龄41-73岁)。正常对照组：距病灶边缘10cm以上正常肺组织标本10例。组织离体后在1小时内放入液氮速冻，在-80℃冰箱保存。肺癌按1997年的TNM分期方法进行分期，其中Ⅰ期、Ⅱ期16例Ⅲ期16例，无0期和Ⅳ期病例，按病理形态学分：鳞状细胞癌25例，腺癌7例。按分化程度分为：高、中分化21例，低分化11例。所有患者均为原发性肺癌，术前均未接受过化疗或放疗等任何治疗。二、方法1．RT-PCR检测Survivin、Caspase-3、Caspase-7基因表达取组织50-100mg，加入1mlTrizolTM在玻璃匀浆器中彻底匀浆。TrizolTM试剂盒说明书用两步法提取总RNA，用紫外分光光度仪(德国JENWAY-Genova公司产品)测定RNA的浓度和纯度。Survivin基因引物序列为5’-CAG GCG GTG ATG TGG ATC-3’(上游)和5’-GTT TGG CTT GCT GGT CTC-3’(下游)扩增片段长度为398bp。Caspase-3基因引物序列为5’-TGT GGC ATT GAG ACA GAC-3’(上游)和5’-CAC TTG CCA TAC AAA CTA-3’(下游)扩增片段长度为371bp。Caspase-7基因引物序列为5’-TGA CCT ATC CTG CCC TCA-3’(上游)和5’-TCT CCT GCC TCA CTG TCC-3’(下游)扩增片段长度为107bp，β-actin为内对照，在25ul反应体系中含有2.5mmol／LdNTP2ul、20pmol／L上下游引物各0.5ul，cDNAl ul、PfuDNA聚合酶1.25U(0.25ul)、5xPfuDNA聚合酶缓冲液2.5ul。PCR反应条件为：Survivin：94℃，3min(94℃，40sec；54.5℃，1min，72℃，1min共35个循环)72℃，7min。Caspase-3：94℃，3min(94℃，40sec；48℃，1min，72℃，1min共35个循环)72℃，7min。Caspase-7：94℃，3min(94℃，40sec；53℃，1min，72℃，1min共35个循环)72℃，7min参照甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测逆转录效率。PCR产物用2％琼脂糖凝胶电泳。用G：BOX(GeneSnap成像分析系统)进行摄像分析。用DL2000DNA Markers为分子大小对照确定阳性琼脂糖凝胶电泳条带。3．统计学处理采用X~2检验，P＜0.05具有统计学意义。结果Survivin基因在正常肺组织和肺癌组织表达分别为10％(1／10)和71.8％(23／32)二者有显著差异(P＜0.01)。Caspase-3基因在正常肺组织和肺癌组织表达分别为80％(8／10)和47.75％(14／32)二者有统计学差异(P＜0.05)。3．Caspase-7基因在正常肺组织和肺癌组织表达分别为70％(7／10)53.12％(17／32)二者无统计学差异(P＞0.05)。NSCLC中Survivin基因与caspase-3，caspase-7基因的表达呈负相关，survivin基因的表达与肺癌临床TNM分期、分化程度、纵隔淋巴结转移存在相关关系。survivin基因是肺癌预后不良的标志讨论凋亡抑制延长了细胞的寿命，有利于突变的累积，是恶性肿瘤形成的重要机制之一。人体细胞凋亡抑制蛋白(human inhibitor of apoptosis protein，IAP)是抑制细胞凋亡的重要成份，这一蛋白家族抑制细胞凋亡的作用远大于bcl-2家族。由于独特的结构、分布和明显的抗凋亡功能，Survivin越来越受到学者们的瞩目。Survivin蛋白表达具有高度的组织特异性，在正常成人已分化的组织不表达，只是在胚胎组织中表达，而肿瘤组织中广泛表达。我们的研究结果显示，肺癌组织Survivin mRNA表达的阳性率为71.80％，与王孝养等报道的肺癌组织中Survivin mRNA表达的阳性率61％结果相似，较Monz。等报道的肺癌组织Survivin mRNA表达的阳性率85.5％低；在病灶旁正常组织Survivin阳性表达仅分别为10％，与王孝养等的检测结果类似。Survivin基因在肺癌组织中较高的阳性表达，提示Survivin基因可能通过抑制肺癌细胞凋亡而对肺癌的发生发展起重要作用，并可能成为一个新的肺癌诊断标志。Survivin基因在肺癌组织中较高的阳性表达，以及在正常组织中不表达或低表达，使其可能成为肺癌基因治疗的靶点。在不同的肿瘤组织中Survivin基因表达与临床病理特征的关系，各家报道不一。我们的研究结果显示，Survivin基因表达与患者的分化程度、淋巴结转移及TNM分期存在相关关系，是肺癌预后不良的标志。Survivin表达与肺癌患者预后的关系有待今后随访做进一步的研究。本实验结果显示，Survivin基因选择性在NSCLC组织中表达上调与病理分级及临床分期具显著差别，可作为肺癌诊断和治疗的新靶点。结论1．Survivin基因选择性的在NSCLC组织中表达上调，提示Survivin基因可能通过抑制肺癌细胞凋亡，对肺癌的发生发展起重要作用Survivin基因有望成为肺癌诊断和治疗的新靶点2．Survivin基因与caspase-3，caspase-7基因的表达呈负相关，Survivin基因可能直接抑制caspase-3、caspase-7基因活性，抑制了细胞的凋亡过程，从而促进了NSCLC的癌细胞不断增生。