【研究背景与目的】帕金森病（Parkinson’sDisease,PD）主要的病理改变是脑内多巴胺能细胞的大量变性丢失,尤以黑质致密区多巴胺能神经元丢失最显著,究其如何防治具有重要意义。硫化氢（Hydrogen sulfide,H₂S）作为一种新型的气体神经调质,具有确切的抗帕金森病作用,但其机制尚未完全阐明。瘦素（Leptin）一种脂肪源性激素,具有神经保护作用。为此,我们将在单侧一次性纹状体注射6-OHDA的帕金森病动物模型上,探讨H₂S是否可通过上调Leptin拮抗6-OHDA诱导多巴胺细胞的丢失及凋亡,以明确Leptin对H₂S抗帕金森病作用的介导效应。【方法】雄性Sprague Dawley（SD）大鼠,单侧一次性纹状体注射6-OHDA 8μg（AP:+1.0 mm;ML:+3.0 mm;DV:-4.5 mm）建立帕金森病动物模型。免疫组化检测TH阳性细胞以观察黑质多巴胺细胞数量;Tunel染色法检测黑质多巴胺神经细胞凋亡;多功能微孔板检测系统检测大鼠黑质组织中Caspase-3的活性,Western blotting检测黑质组织中Bcl-2及Bax蛋白的表达。【结果】1.H₂S抑制6-OHDA诱导大鼠黑质多巴胺神经元丢失SD大鼠给予Na HS（30或100μmol/kg,i.p.）预处理1 w后,予单侧一次性纹状体注射6-OHDA 8μg,继续予NaHS（30或100μmol/kg,i.p.）处理4 w。取黑质组织行免疫组化检测TH阳性细胞数量,6-OHDA可使大鼠黑质组织中TH阳性细胞数量明显减少,NaHS（100μmol/kg）可使6-OHDA大鼠黑质组织TH阳性细胞数量明显增多,表明H₂S可抑制6-OHDA诱导大鼠黑质多巴胺神经元丢失。2.H₂S拮抗6-OHDA诱导大鼠黑质神经元凋亡SD大鼠给予NaHS（30或100μmol/kg,i.p.）预处理1 w后,予单侧一次性纹状体注射6-OHDA 8μg,继续予NaHS（30或100μmol/kg,i.p.）处理4 w。取黑质组织tunel染色检测神经元凋亡,6-OHDA可使大鼠黑质组织中神经元凋亡率明显增多,NaHS（100μmol/kg,i.p.）可使6-OHDA大鼠黑质组织神经元凋亡率明显减少。同时,多功能微孔板检测系统检测Caspase-3活性,6-OHDA可明显增高大鼠黑质组织中Caspase-3活性,NaHS（100μmol/kg,i.p.）可明显降低6-OHDA大鼠黑质组织Caspase-3活性。Western blotting检测黑质组织中抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax的表达,6-OHDA能降低大鼠黑质组织中Bcl-2蛋白表达,升高Bax蛋白表达,而NaHS（100μmol/kg,i.p.）能增高6-OHDA大鼠黑质组织Bcl-2蛋白,降低Bax蛋白的表达。表明H₂S可抑制6-OHDA诱导大鼠黑质神经元凋亡。3.H₂S上调6-OHDA处理的大鼠黑质组织Leptin表达SD大鼠给予Na HS（30或100μmol/kg,i.p.）预处理7 d后,予单侧一次性纹状体注射6-OHDA 8μg,继续予NaHS（30或100μmol/kg,i.p.）处理4 w。Western blotting检测黑质组织中Leptin的表达,6-OHDA能降低大鼠黑质组织中Leptin蛋白表达,而Na HS（100μmol/kg,i.p.）能增高6-OHDA大鼠黑质组织Leptin蛋白的表达。表明H₂S可上调6-OHDA处理的大鼠黑质组织Leptin表达。4.Leptin-OBR（Leptin受体的封闭型抗体）逆转H₂S对6-OHDA损伤大鼠黑质多巴胺神经元丢失的保护作用大鼠给予NaHS（30或100μmol/kg,i.p.）预处理1 w后,予单侧一次性纹状体注射8μg 6-OHDA,同时,行侧脑室埋管。Leptin-OBR（2μg,i.c.v.）与Na HS（100μmol/kg,i.p.）继续共处理4 w。取黑质组织免疫组化检测TH阳性细胞数量,给予Leptin-OBR后,H₂S（100μmol/kg,i.p.）保护组黑质组织中TH阳性细胞数量明显下降,表明Leptin-OBR可逆转H₂S对6-OHDA诱导大鼠黑质多巴胺神经元丢失的拮抗作用。5.Leptin-OBR逆转H₂S对6-OHDA损伤大鼠黑质组织神经元凋亡大鼠给予NaHS（30或100μmol/kg,i.p.）预处理1 w后,予单侧一次性纹状体注射8μg 6-OHDA,同时,行侧脑室埋管。Leptin-OBR（2μg,i.c.v.）与NaHS（100μmol/kg,i.p.）继续共处理4 w。取黑质组织tunel染色检测神经元凋亡,给予Leptin-OBR后,H₂S（100μmol/kg,i.p.）保护组黑质组织中凋亡率明显增多。同时,多功能微孔板检测系统检测Caspase-3活性,给予Leptin-OBR后,H₂S（100μmol/kg,i.p.）保护组大鼠黑质组织中Caspase-3活性明显增高。Western blotting检测黑质组织中抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax的表达,Leptin-OBR能降低H₂S（100μmol/kg,i.p.）保护组大鼠黑质组织中Bcl-2蛋白表达,升高Bax蛋白表达。表明Leptin-OBR可逆转H₂S对6-OHDA诱导大鼠黑质多巴胺神经元凋亡的拮抗作用。【结论】H₂S通过上调黑质Leptin抑制6-OHDA诱导的大鼠多巴胺神经元丢失及凋亡