【摘 要】
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目的:明确P2X_7受体在择时针刺调控穴区成纤维细胞骨架中的作用。方法:选择野生型C57BL/6J小鼠和P2X_7-/-小鼠各18只,根据痛阈值按照完全随机原则分组。野生型小鼠分为空白组6只、造模组12只,将造模组制作成炎性疼痛模型,即将完全弗氏佐剂注射入其右足足垫部皮内,造模成功后再根据痛阈值随机分为模型组6只、模针组6只。P2X_7-/-小鼠的分组、造模方法同野生型小鼠。根据前期研究结果筛选特
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目的:明确P2X7受体在择时针刺调控穴区成纤维细胞骨架中的作用。方法:选择野生型C57BL/6J小鼠和P2X7-/-小鼠各18只,根据痛阈值按照完全随机原则分组。野生型小鼠分为空白组6只、造模组12只,将造模组制作成炎性疼痛模型,即将完全弗氏佐剂注射入其右足足垫部皮内,造模成功后再根据痛阈值随机分为模型组6只、模针组6只。P2X7-/-小鼠的分组、造模方法同野生型小鼠。根据前期研究结果筛选特定时间点ZT8,在ZT8针刺足三里,每5min捻转行针一次,时间为1min,频率为120次/min,共留针0.5h,总共7天的治疗。对照组以相同的方式捆绑固定0.5h,不针刺。荧光双标法结合激光共聚焦成像法检测野生型小鼠穴区成纤维细胞上P2X7受体表达量;通过RT-PCR检测到野生型小鼠穴区p38MAPKmRNA的表达;荧光双标法结合激光共聚焦成像法检测穴区成纤维细胞骨架形态和F-actin、β-tubulin表达量。结果:1.ZT8针刺对C57BL/6J小鼠穴区成纤维细胞上P2X7受体有明显的调节作用。针刺后成纤维细胞上P2X7受体光密度含量均高于其它组别,与空白组比,P=0.006,P<0.01;与模型组比,P=0.044,P<0.05。2.ZT8针刺时,C57BL/6J小鼠模型组穴区p38MAPKmRNA表达高于空白组,P=0.014,P<0.05;C57BL/6J小鼠模针组穴区p38MAPKmRNA表达低于模型组,P=0.034,P<0.05。3.LSCM镜下观察到P2X7-/-小鼠各组成纤维细胞排列有一定变化,细胞骨架的数量较少,ZT8针刺后细胞骨架呈不规则的圆梭形,染色均匀,聚集在细胞核附近,并相互交织成丝状,与细胞核走向平行。对比C57BL/6J小鼠,P2X7-/-小鼠各组细胞骨架的数量非常少,染色也不够浓郁。P2X7-/-小鼠针刺组的β-tubulin、F-actin表达明显高于空白组和模型组,P=0.000,P<0.01;C57BL/6J小鼠针刺组的β-tubulin和F-actin表达明显高于空白组和模型组,P=0.000,P<0.01。结论:择时针刺对小鼠穴区成纤维细胞骨架重构有明确的调控作用,成纤维细胞上P2X7受体参与了这个过程,并且这种调控作用可能与p38MAPK信号通路有关。
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