重组截短型人角质细胞生长因子(rhKGF<,des1-23>)的克隆、表达与活性初步检测

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bb253
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
角质细胞生长因子(Keratinocyte Growth Factor)是成纤维细胞生长因子家族的一员,它通过与受体(KGFR)的结合,特异性地刺激上皮细胞的增殖,对皮肤、胃、肠、肾、膀胱、肺等上皮的损伤有修复作用,能减少放化疗所带来的副作用。而N端前23位氨基酸残基缺失后的截短型KGF(KGF<,des1-23>)具有更高的稳定性和活性。 为了制备高纯度和高活性的人截短型KGF,本研究采用基因重组技术,选择单一、融合和分泌三种表达方式构建了多个不同的原核表达菌株,并构建了巴斯德毕赤酵母胞外和胞内表达两种菌株,分析了不同菌株的表达情况。本研究还摸索了表达菌株的发酵工艺、探索了不同形式表达产物(包涵体、可溶蛋白和融合蛋白)的纯化工艺。本研究还通过蛋白N端测序和免疫印迹对目标蛋白进行了鉴定。最后,采用上皮细胞和间质细胞进行了促细胞增殖活性的检测。 最终,本研究得到了两个原核表达菌株,初步建立了纯化工艺并获得少量的目标产物;蛋白N端测序和免疫印迹验证结果表明,表达产物与理论设计的人KGF<,des1-23>相符;细胞实验显示,本研究获得的表达产物对上皮细胞有明显的促增殖活性。 另外,本研究对KGF<,des1-23>蛋白的突变体进行了同源模建,通过分析其突变前后的原子位移均方根偏差构象变化,找出可能的重要位点,并通过基因重组的方法进行了初步的分析验证。
其他文献
富营养化已经成为全世界所关注的重大环境问题。随着人类活动的加剧,河流污染日趋严重,使得河口成为陆源污染物入海的主要通道。世界上许多著名河口受到营养盐、有机物和重金属
背景甲状腺球蛋白(Thyroglobulin, TG)基因为自身免疫性甲状腺疾病主要易感基因之一,在不同种族和地区,TG基因多态性不同。目前关于研究TG基因外显子10、12、33序列分析与自
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
本文对螺旋藻、海水小球藻和淡水小球藻进行培养研究,对螺旋藻、海水小球藻进行了金属离子耐受性试验,对螺旋藻、海水小球藻和淡水小球藻进行固定化试验,摸索同定化条件,对固定化
摘要:在英语阅读课中开展小组合作学习,就可以让学生主动参与阅读过程,培养其自主意识、自主能力和自主习惯,鼓励学生主动思考和主动探究,同时还可以增加其趣味性,要读懂和读熟课文都变得容易简单,阅读课对于学生来说就变成了一种享受。本文从六个方面探究了小组合作学习在英语阅读课中的应用。  关键词:小组合作;英语;阅读  中图分类号:G632.0 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)10
在生物体内,过亚硝酸根是由一氧化氮和超氧根阴离子反应生成的一种细胞毒性物质,具有强氧化和硝化能力,可以和许多生物大分子反应,如可以造成DNA碱基修饰和单链断裂,蛋白质氧化和
Sox (SRY-box containing)基因在动物界广泛存在,目前已在鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类动物中发现超过100个成员,根据HMG盒的相似性,将其划分为A-K 11个亚族。Sox4基
本文对海南东寨港红树林土壤原生动物群落生态学进行了研究。文章分别调查了海南东寨港红树林3种不同生境红树林地土壤纤毛虫、肉足虫和鞭毛虫的群落结构,并结合土壤理化性质
胶质瘤是一种常见的中枢神经系统肿瘤,尽管目前应对肿瘤有多种治疗措施,但恶性胶质瘤患者的预后仍较差,因此寻找新型抗肿瘤药物依然具有重要意义。蟾毒灵是中药蟾酥的主要成分,是
冷水刺激前庭器官对大鼠胃活动的影响及其机制探讨前庭器官在体内主要参与前庭眼球反射(vestibulo-ocular reflex),前庭脊髓反射(vestibulo-spinal reflex)和前庭内脏反射(ves