【摘 要】
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目的通过检测炎症、氧化应激和细胞凋亡等神经损伤相关基因的表达,检测铁死亡信号通路相关蛋白的表达,从而探讨电针治疗慢性脑低灌注的作用机制,为电针治疗脑低灌注导致的认知障碍探寻关键靶点及有效方法提供理论实验基础。方法采用Morris水迷宫分析CCH模型大鼠的空间学习记忆能力,并评估大鼠脑损伤。通过Western blot分析NOX1、NOX2和NOX4基因在CCH模型大鼠中的表达;利用qRT-PCR检
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目的通过检测炎症、氧化应激和细胞凋亡等神经损伤相关基因的表达,检测铁死亡信号通路相关蛋白的表达,从而探讨电针治疗慢性脑低灌注的作用机制,为电针治疗脑低灌注导致的认知障碍探寻关键靶点及有效方法提供理论实验基础。方法采用Morris水迷宫分析CCH模型大鼠的空间学习记忆能力,并评估大鼠脑损伤。通过Western blot分析NOX1、NOX2和NOX4基因在CCH模型大鼠中的表达;利用qRT-PCR检测microRNA的表达并筛选合适的microRNA;通过生物信息学和双荧光素酶实验,确定microRNA与NOX基因之间的互作关系;TUNEL染色法观察脑组织细胞凋亡;ELISA法检测动脉血及脑组织中Ang Ⅱ、NOX4、ROS、SOD、MDA、CAT和IL-6 的相对含量;qRT-PCR 和 Western blot 检测 NOX4、COX-2、eNOS 和 iNOS 的表达;通过免疫荧光实验观察NOX和GFAP的表达。普鲁士蓝染色观察电针治疗后CCH模型大鼠脑铁沉积;qRT-PCR检测miR485-3p和miR29的表达;qRT-PCR和Western blot检测 PTGS2、ASCL4、IREB2、GPX4 和 FPN 基因的表达。结果1.电针治疗可以有效的改善动物的认知功能。2.NOX 1、NOX2和NOX4基因的表达量在CCH模型组明显上调,电针治疗后NOX1、NOX2和NOX4基因表达显著下调。3.电针治疗后,9种microRNA的相对表达量显著改变,其中miR96、miR501-3p、miR9-5p、miR9 和 miR27a 下调,miR132、miR181c、miR137、miR195上调。4.生物信息学分析和双荧光素酶实验证实发miRNA137与NOX4基因存在互作关系。5.电针治疗后神经元细胞凋亡减少,miR137的表达明显上调,同时NOX4基因、炎症和氧化应激的相关指标明显下调。6.电针治疗可以有效改善CCH模型大鼠的脑铁沉积。7.电针治疗后CCH模型大鼠FPN和GPX4表达明显上调,ASCL4、Ireb2、PTGS2表达明显下调。miR29表达量明显上调,miR485-3p表达明显下调。结论1.电针治疗改善CCH大鼠的空间学习记忆能力。2.通过上调miR137抑制NOX4基因的表达,进而降低活性氧的产生可能是电针治疗认知障碍的作用机制之一。3.电针治疗抑制脑缺血导致的炎症反应,防止星形胶质细胞过度的胶质化,促进神经元细胞的修复和功能恢复;通过miR137调控NOX4基因的表达,减少活性氧的产生,降低一氧化氮合酶的表达,减轻脑缺血造成的氧化应激反应,缓解脑损伤。4.电针治疗通过对microRNA的调控影响ASCL4、Ireb2、PTGS2、FPN和GPX4基因的表达改善慢性脑低灌注导致的脑铁沉积。
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