目的：对兔VX2肝移植瘤不同时期外周血中血小板活化标志物CD62P表达水平进行监测、比较,观察血小板活化标志物CD62P表达水平的变化以及血小板活化与血栓形成、肝癌的发生、发展、浸润、转移之间的关系,探讨肿瘤细胞与血栓形成、血小板活化之间的相关性,及血小板活化在肝癌病程进展、血行转移中的重要作用,为临床肝癌的诊断、治疗、病情评估及预后等方面提供更多的理论依据,从血液学角度寻求抗癌治疗新靶点,进一步提高肝癌患者的临床诊治水平,延长肝癌患者的寿命,提高肝癌患者的生活质量。方法：1.将健康新西兰大白兔共90只,随机分为：①肝移植瘤模型组30只；②假手术组30只；③正常对照组30只；2.兔VX2肝移植瘤瘤株的复苏：从负氮瓶中取出兔VX2瘤株(瘤株由第四军医大学唐都医院动物实验中心提供),置于恒温箱中水浴复苏,复苏温度约为25-28℃,5分钟后取出复苏的瘤株,置于无菌玻璃器皿中,加入3ml含2万u庆大霉素的生理盐水,在无菌箱中将瘤株剪成1-2mm3大小的碎块,混匀制成混悬液备用；3、荷瘤兔的制备：选健康新西兰大白兔2只,固定于动物台上,选右侧臀部作为注射点,脱毛、常规消毒注射点皮肤后,用18G针头注入1ml备用的瘤细胞混悬液,拔针后压迫5分钟,防止瘤细胞混悬液从穿刺道溢出,保证瘤株种植成功。荷瘤兔种植1周后,观察荷瘤兔存活,触摸其右侧臀部已长出直径约2cm大小的包块,荷瘤兔制备成功；4、瘤细胞混悬液的制备：准备切开荷瘤兔臀部肿瘤组织,制备瘤细胞混悬液,进行传代转种。用速眠星II号将荷瘤兔全麻,无菌条件下剥离肿瘤,切开瘤体,取靠近包膜的灰白色鱼肉样组织置于生理盐水(含庆大霉素2万U)中,剔除坏死组织及纤维组织,将瘤组织剪碎成1-2mm3小块,加入生理盐水适量制成浓度约为5×1010个/L的混悬液备用。5、兔VX2肝移植瘤模型建立选健康新西兰大白兔30只由背部脊柱旁皮下注射速眠星Ⅱ号1ml,观察实验动物麻醉成功。将其仰卧位固定于动物台上,取上腹部剑突下正中线处为切口选择处,局部脱毛、常规消毒后切开皮肤,切口长约3cm左右,逐层分离皮下组织,打开腹腔,暴露肝脏。轻柔将肝脏拉出,用18G针头在肝脏左叶注入瘤细胞混悬液1ml,进针深度约2cm左右。拔针后用明胶海绵填塞、压迫穿刺道5分钟,回纳肝脏,逐层关腹。依次成功种植兔VX2肝移植瘤模型30只；6、假手术组的建立选健康新西兰大白兔30用上述同样方法麻醉后,仰卧位固定于动物台上,取上腹部剑突下正中线处为切口处,局部脱毛、常规消毒后切开皮肤,切口长约3cm左右,逐层分离皮下组织,打开腹腔,暴露肝脏。轻柔将肝脏拉出,在肝脏左叶用18G针头注入生理盐水1ml,进针深度约2cm左右。拔针后用明胶海绵填塞、压迫穿刺道5分钟,回纳肝脏,逐层关腹,依次成功操作假手组兔子30只；7、正常对照组30只健康新西兰大白兔未进行任何干预作为对照；8、采用流式细胞术(FCM)分别于瘤株种植前、瘤株种植后6h、48h、1W、2w采各组实验动物外周血,检测血小板活化标志物CD62P表达水平,比较兔肝移植瘤模型组不同时间外周血血小板活化标志物CD62P表达水平的变化,观察各组实验动物血液循环中CD62P表达水平的差异,分析转移组与无转移组CD62P表达水平的不同,所得数据用均数±标准差(x±s)表示,两样本均数比较采用成组设计的t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。9、在瘤株成功种植后1w、2w各组分别处死并解剖15只实验动物,肉眼观察肝脏、肺内有无转移,观察静脉内有无血栓形成；检测转移组与无转移组外周血血小板活化标志CD62P的表达水平,比较转移组及无转移组间血小板活化标志物表达水平的不同；分析有血栓形成组与无血栓形成组外周血小板活化标志物表达有无差异。结果：1、瘤株种植前各组外周血血小板活化标志物呈低表达状态,各组均数对比P值分别为0.083△0.10▲0.088°,组间对比无明显差异；2、瘤株种植后6h假手术组、肝移植瘤模型组外周血血小板活化标志物CD62P表达水平增加,假手术组与正常对照组比较P=0.01,肝移植瘤模型组与正常对照组比较P=0.012,差异均有统计学意义；肝移植瘤组与假手术组对比P=0.084,组间对比无明显变化；3、瘤株种植后48h,假手术组与正常对照组比较P=0.023,肝移植瘤组与正常对照组对比P=0.01,肝移植瘤组、假手术组血小板活化标志物的表达水平高于正常对照组。肝移植瘤组与假手术组对比P=0.013差异有统计学意义,肝移植瘤组血小板活化标志物CD62P表达高于假手术组；4、瘤株种植后1W、2w时假手术组与正常对照组比较P值均大于0.05,组间对比无统计学意义；肝移植瘤组与正常对照组、假手术组对比P值均小于0.05,兔肝移植瘤模型组外周血血小板活化标志物水平明显高于正常对照组及假手术组；5、肝移植瘤组外周血血小板活化标志物CD62P表达水平明显高于正常对照组及假手术组,曲线图示：瘤株种植后外周血小板活化标志物表达水平随着病程进展逐渐上升；正常组与假手术组曲线,在不同的检测时间外周血血小板活化标志物表达水平变化不大；假手术组曲线在种植后6h、48h稍有上升,1w后逐渐恢复,考虑与假手术组血小板活化标志物表达的短暂增加与手术创伤引有关,但其增加的幅度不大；6、瘤株种植后1W、2w后肿瘤均有转移,而且2w后检测外周血CD62P表达水平明显高于1w后,转移组与无转移组对比P值均小于0.05,差异有统计学意义,转移组的血小板活化标志物表达明显高于无转移组；7、瘤株种植后1w、2w,肝移植瘤组血小板活化标志物检测数据对比,肝内转移组与肺内转移组,肝内转移组与肝内、肺内均转移组及肺内转移组与肝内、肺内均转移组比值P值均大于0.05,组间数据对比变化不大；8、瘤株种植后1W、2w处死各组实验动物15只,发现1w后肝移植瘤组静脉血栓形成1例,2w后肝移植瘤组静脉血栓形成8例,血栓形成率约为30%；1w后假手术组静脉血栓形成1例,2w后未见血栓形成,考虑假手术组1例血栓形成与手术创伤所致凝血功能改变有关；正常对照组未见血栓形成。结论：1、兔VX2肝移植瘤瘤细胞与血小板相互作用,使血液循环中的血小板处于激活状态,其活化标志物表达水平增加；2、肿瘤的发生、发展、转移伴随着血小板活化,肿瘤中晚期外周血血小板活化标志物表达水平较早期明显增加,活化的血小板可能参与了肿瘤的浸润、转移；3、肿瘤细胞和活化的血小板相互作用,有助于血栓的形成,恶性肿瘤多伴有血栓形成；4、肿瘤细胞、血小板活化、血栓形成之间相互作用,在肝癌的发生、发展、转移中起着十分重要的作用,血小板活化标志物CD62P表达水平的检测可以作为肝癌病情进展及预后评估的指标之一。