pTAC14甲基化酶功能对拟南芥叶绿体发育影响的研究

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pTAC14是叶绿体编码的RNA聚合酶复合物必需组分之一,ptac14T-DNA插入突变体表现为幼苗白化致死,pTAC14同pTAC12相互作用一起调控叶绿体基因的表达。但是,其生物功能尚不清楚。本论文研究了pTAC14的功能。pTAC14具有SET和Rubis-binding两个结构域。生物信息学分析表明pTAC14具有典型的SET蛋白质赖氨酸甲基转移酶所共有的若干氨基酸保守基序。定点诱变和转基因互补分析发现,G103、N286、Y324氨基酸残基对维持pTAC14的功能是必需的。体外的Pulldown实验表明,pTAC14能结合Rubisco大亚基,即rbcL。体外甲基化孵育实验和Westernblot检测实验表明,rbcL能够被pTAC14甲基化。这些结果表明,pTAC14能够作为甲基转移酶对rbcL进行甲基化。另外,本论文也分析了PEP复合物中必需组分缺失的突变体中的核心亚基rpoA和PEP成员pTAC12的积累情况,结果表明,ptac7、ptac10、ptac14、trxZ和atpG白化突变体中核心亚基rpoA的积累量呈现相同下降趋势,和1/4野生型中rpoA的量差不多。ptac7和trxZ突变体中pTAC12的积累量相同,都表现为严重下降,ptac10和atpG背景下pTAC12的积累量同1/4野生型中pTAC12表达量相同,ptac14背景下pTAC12的积累量略微下降。我们根据pTAC14蛋白结构特征分成六段分别构建上pGBKT7载体,通过酵母双杂实验发现这六段均不和pTAC12存在相互作用,根据此研究结果,我们推测含SET结构域的蛋白质的C端相邻结构域对蛋白质完成其功能具有辅助作用,是这类蛋白质完整结构的关键部分,对其发挥甲基转移酶至关重要。综上所述,这些结果表明pTAC14作为TAC复合物一员,其甲基转移酶活性对叶绿体的发育具有非常重要的作用。
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