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背景:神经母细胞瘤病理分期中危组和高危组的患者,采取放射治疗可以显著增加肿瘤的局部控制率,提高患者生存率。然而,部分神经母细胞瘤患者的放射治疗效果不好,存在放疗抵抗的现象。文献报道,在肿瘤的放疗抵抗作用中,NF-κB(nuclear factor‐κB,NF‐κB)通路的激活起到重要作用。目的:本研究旨在探讨NF-κB通路在γ辐射所致SH-SY5Y细胞损伤中的作用功能与机制。方法:常规培养人神经母细胞瘤细胞—SH-SY5Y细胞系,不同剂量(0、0.2、0.5、2、5、10和20 Gy)γ射线照射细胞,分别在照射后不同时间点(4、8、24和48小时)收集细胞。(1)使用倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态学改变。(2)采用MTT(Thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)实验检测SH-SY5Y细胞增殖数量。(3)采用PI染色流式细胞术检测SH-SY5Y细胞周期变化与凋亡细胞比例。(4)采用Western blot观察DNA损伤相关蛋白、NF-κB通路蛋白、凋亡通路相关蛋白的表达情况。(5)采用荧光定量PCR观察SH-SY5Y细胞凋亡通路相关基因、NF-κB通路基因和细胞增殖基因的表达情况。(6)P65-DNA结合实验检测NF-κB(P65)蛋白与DNA的结合活性。(7)双荧光素酶报告基因实验检测NF-κB(P65)蛋白的转录活性。结果:(1)SH-SY5Y细胞受到γ射线照射后,细胞肿胀,边缘毛糙,触角增多。随着照射后时间延长和照射剂量增大,上述形态学改变越明显。(2)与对照组相比,γ射线照射组的细胞数量呈现剂量依赖性减少(P<0.01)。(3)与对照组相比,γ射线照射组的细胞凋亡比例和G2/M期细胞比例呈现剂量依赖性增加(P<0.01)。(4)与对照组相比,γ射线照射组的细胞DNA损伤相关蛋白γH2ax、NF-κB通路蛋白p65与磷酸化p65、凋亡通路蛋白Cleaved Caspase-3与Parp的表达量增加。(5)与对照组相比,γ射线照射组的细胞NF-κB通路基因p65的表达上调(P<0.01),凋亡通路基因Caspase-3、Bax和Parp的表达上调(P<0.05),细胞增殖基因Pcna下调(P<0.01),细胞周期调控基因p21上调(P<0.01)。(6)与对照组相比,γ射线照射组的细胞NF-κB(P65)蛋白与DNA的结合活性增加(P<0.05),NF-κB(P65)蛋白的转录活性增加(P<0.01)。结论:(1)γ辐射可激活炎症、凋亡、DNA损伤通路,导致SH-SY5Y细胞损伤。辐射损伤效应包括促进SH-SY5Y细胞的凋亡、G2/M期阻滞和增殖抑制。(2)γ辐射可能通过NF-κB通路的激活导致SH-SY5Y细胞的损伤,p65蛋白是其中关键的转录因子。