猕猴桃组织培养和快繁技术研究

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猕猴桃作为新兴水果,营养丰富,被誉为“水果之王”,以富含Vc和风味独特而深受人们喜爱。‘华特’猕猴桃(Actinidia eriantha’White’)是浙江省农科院园艺所等单位从野生毛花猕猴桃中选育出的自然变异品种,鲜果中Vc含量高达568.9~1137.0 mg/100g,其果皮易剥离,是目前为止最易剥皮的猕猴桃品种;‘红阳’猕猴桃(Actinidia chinensis ’Hongyang’)为中国特有野生猕猴桃资源——系列红肉猕猴桃(Actinidia chinensis var. rufopulpa)品种(包括‘红阳’猕猴桃、‘红华’猕猴桃和‘红美’猕猴桃)之一,其红肉的性状极具开发利用价值。‘华特’和‘红阳’猕猴桃作为稀有珍贵品种,具有广阔的市场前景和开发利用价值。本试验以毛花猕猴桃‘华特’和中华猕猴桃‘红阳’为试材,通过对‘华特’植株顶芽、带腋芽茎段、叶片、叶柄、果实和根段等多种外植体的离体培养,研究其诱导成苗、幼苗增殖、生根移栽技术,建立了‘华特’猕猴桃快速繁殖体系;以及在‘华特’离体培养研究的基础上,通过对‘红阳’猕猴桃的幼嫩叶片和带腋芽嫩茎的离体培养,建立了‘红阳’猕猴桃的快繁体系。建立高效、稳定的离体再生体系将有助于促进基因工程方法的应用,以提高毛花猕猴桃和中华猕猴桃的商品性。主要研究结果如下:1、通过对‘华特’猕猴桃田间材料和试管苗的不同外植体、不同成苗途径的系列研究,建立了以下‘华特’猕猴桃快速繁殖体系:1)器官发生型途径适宜的外植体为幼嫩的叶片。不同外植体产生的愈伤组织芽分化率差异很大,叶片愈伤组织再分化率最高,达到85.33%,叶柄次之,为79.17%,而根段、中果皮愈伤的再分化率为0。对不同大小叶片培养的进一步研究得出:<3 cm幼叶的叶尾部分芽分化率达100%,而>6 cm的叶片很难诱导形成愈伤组织。2)通过对叶片、叶柄愈伤组织和不定芽分化诱导,筛选出诱导叶片愈伤和不定芽分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,出愈率为100%,出芽率高达85.33%,平均芽数6.34个/外植体;MS+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA对叶柄的诱导效果最好,出芽率和平均芽数分别为79.17%,6.54个/外植体。3)带芽外植体途径最适宜外植体为春、夏季取材的未木质化带芽茎段。对带腋芽茎段进行芽诱导和增殖培养,筛选出最适宜的腋芽诱导培养基和增殖培养基,分别为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA和MS+3.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,腋芽萌发率达86.67%,月增殖系数达4.33。4)采用瓶内生根法和瓶外生根法对再生苗进行生根试验。瓶内生根最佳培养基为1/2 MS+0.6 mg/L IBA,生根率达到96.67%,平均每棵苗上有根16.1条。用苔藓包裹再生苗基部进行瓶外生根,生根率最高达93.75%,简化了操作程序。生根苗在珍珠岩:泥炭=1:2的基质中成活率达92%以上。2、通过对‘红阳’猕猴桃幼嫩叶片和带腋芽嫩茎的不同成苗途径的研究,建立了以下‘红阳’猕猴桃快速繁殖体系:1)通过对幼嫩叶片愈伤组织和不定芽分化诱导,筛选出MS+1.0 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA所得到的愈伤组织易于分化成苗,芽分化率达到93.33%,不定芽的增殖系数平均达到5.2个。2)通过对带腋芽茎段进行芽诱导和增殖培养,筛选出MS+1.0 mg/L 6-BA+.01 mg/LNAA最适宜带芽茎段上腋芽的萌发,平均出芽率达83.33%,MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L GA为最佳增殖培养基,增殖系数平均达4.5。3)对再生苗进行生根试验,最佳生根培养基为1/2 MS+0.7 mg/L IBA,生根率为75.0%。对生根苗进行炼苗后移栽到珍珠岩和泥炭按1:2体积比制成的基质中,成活率达到90%以上。
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