【摘 要】
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胰岛素样生长因子(IGF)和表皮生长因子(EGF)广泛分布于机体各个部位,是生长因子家族中的重要成员,在生物体内发挥着重要功能。IGF通过结合胰岛素样生长因子绑定蛋白(IGFBP)发挥生理功能,体内大多数IGF呈IGF/IGFBP复合物的形式,只有少数以游离形式存在。目前,关于IGF和EGF在鱼类中的功能主要聚焦在肝脏和性腺组织中,而其在垂体中的具体功能尚不清楚。基于此,本论文以草鱼为研究对象,系
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胰岛素样生长因子(IGF)和表皮生长因子(EGF)广泛分布于机体各个部位,是生长因子家族中的重要成员,在生物体内发挥着重要功能。IGF通过结合胰岛素样生长因子绑定蛋白(IGFBP)发挥生理功能,体内大多数IGF呈IGF/IGFBP复合物的形式,只有少数以游离形式存在。目前,关于IGF和EGF在鱼类中的功能主要聚焦在肝脏和性腺组织中,而其在垂体中的具体功能尚不清楚。基于此,本论文以草鱼为研究对象,系统阐释IGF1/IGFBP1a和EGF在硬骨鱼类垂体中的功能。具体结果如下:1、IGF1/IGFBP1a参与调控草鱼垂体LH和FSH表达。首先,通过克隆得到草鱼IGFs(IGF1、IGF2a、IGF2b、IGF3)和IGFBP1(IGFBP1a、IGFBP1b)基因。序列比对结果显示草鱼IGFs家族序列高度保守,哺乳动物和草鱼IGFBP1a在C末端和N末端区域高度保守,但在连接域中均不保守。组织表达分析结果显示IGFBP1a主要在草鱼垂体、肾脏、脾脏中高表达。利用免疫组化对IGFBP1a在草鱼垂体中的具体分布位置进行进一步定位,结果显示IGFBP1a广泛分布于后腺垂体区中的神经垂体区,预示IGFBP1a可能在垂体中发挥重要功能。基于此,利用IGF1和IGFBP1a分别处理草鱼垂体原代培养细胞,转录组分析结果显示IGF1和IGFBP1a能够分别诱导草鱼垂体中786个和616个差异基因表达,这些差异基因主要参与了细胞生长、发育过程、免疫反应等重要生理功能。接着,以草鱼垂体原代培养细胞为研究对象,进一步检测发现IGF1能够以时间和剂量依赖性方式促进LHβ和FSHβ的表达,而IGFBP1a则以时间和剂量依赖性方式抑制LHβ和FSHβ的表达。此外,IGF1和IGFBP1a共同处理草鱼垂体细胞后,发现IGFBP1a能够阻断IGF1对LHβ和FSHβ的诱导作用,并且IGFBP1a能够显著抑制IGF1对ERK和AKT的磷酸化激活水平。综上结果表明IGFBP1a对垂体LHβ和FSHβ表达的抑制作用是通过阻断内源性IGF1的作用实现的。2、EGF能够直接诱导草鱼垂体中UTS1、EGR1和MMP13的表达。EGF是一种6k Da的小分子蛋白,含有53个氨基酸,通过与其受体ErbBs结合在细胞增殖、分化和卵泡形成过程中发挥重要作用。在哺乳动物和鱼类中,关于EGF的功能研究主要集中在乳腺和性腺组织,而其在垂体中的功能研究较少。基于此,以草鱼垂体细胞为研究模型,首先,转录组分析结果显示EGF诱导垂体差异表达基因主要富集在金属离子绑定、癌症相关通路和代谢等相关通路上。其次,离体实验进一步证实EGF能够以时间和剂量依赖性的方式显著诱导草鱼垂体细胞中UTS1、EGR1和MMP13的表达。接着,受体后信号通路研究显示EGF通过结合ErbB1和ErbB2受体,并激活其受体后MEK/ERK和PI3K/AKT/m TOR通路促进UTS1和EGR1的表达,而EGF对MMP13的调节作用则是通过结合ErbB1受体并激活其受体后MEK/ERK通路完成的。
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