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H9亚型禽流感（Avian influenza,AI）和鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）感染是危害养禽业的重要呼吸道传染病,鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑等多种禽类均可感染。疫苗免疫是防控H9亚型禽流感发生与流行的主要手段,而鸡毒支原体病的防控,只有部分种鸡场使用疫苗。因此,血清学检测对于感染后的快速诊断和疫苗免疫后的抗体水平定量检测尤其重要。传统的血清学方法,一般需要专业人员操作,步骤繁琐,耗时长。胶体金检测操作简单,快速,成本低,无需专业的技术人员和昂贵的设备,可以在基层广泛应用。本实验室筛选获得了一株小鼠抗多种禽类IgY Fc片段的单抗,该单抗能与鸡、鸭、鹅等多种禽类血清反应,为建立一种能检测多种禽类血清抗体的胶体金试纸条方法奠定了基础。同时结合免疫定量速测仪的信号识别,建立了定量检测方法。本研究分别制备了一种适用于多种禽类H9亚型禽流感病毒抗体定量检测胶体金试纸条和一种适用于多种禽类鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条,既可定性检测,用于未免疫禽类鸡毒支原体感染后的快速诊断;也可定量检测,用于疫苗免疫后的抗体水平监测。主要研究结果如下:1.H9亚型禽流感病毒HA1蛋白、鸡毒支原体vlhA1.2蛋白的原核表达与纯化构建了H9亚型禽流感病毒HA1蛋白、鸡毒支原体vlhA1.2蛋白的重组原核表达质粒,分别在大肠杆菌中进行了诱导表达并纯化蛋白,其重组蛋白大小分别为61KDa和92KDa,Western Blot检测表明两种蛋白均具有良好的反应原性。2.抗多种禽类IgY Fc片段单克隆抗体的制备与纯化复苏抗多种禽类IgY Fc片段单克隆抗体生产杂交瘤细胞株10A1,注射小鼠,产生腹水,经辛酸-硫酸铵法纯化,获得了高纯度、高活性的鼠抗多种禽类IgY Fc片段单克隆抗体。3.H9亚型禽流感病毒抗体定量检测胶体金试纸条的研制与初步应用利用间接法制备了H9亚型AIV抗体定量检测胶体金试纸条。胶体金标记抗多种禽类IgY Fc片段单克隆抗体,确定最佳标记量为9μg McAb/mL胶体金,最佳标记pH为每毫升胶体金加入8μL 0.1mol/L K2CO3溶液。试纸条最佳反应体系为:吸水垫H5073,金标垫Fusion4,样品垫Ahlstrom8964,包被液PB缓冲液（pH7.2）+3%甲醇,样品垫封闭液四硼酸钠缓冲液（pH9.0）作为基础液,C线包被羊抗鼠IgG（0.5mg/mL）,T线包被AIV-HA19蛋白（0.8mg/mL）,金标抗体的喷量为6μL/cm。该试纸条与禽的其它重要病原阳性血清无交叉反应,特异性强;结合胶体金免疫定量速测仪,以HI效价为X轴,以（T/C）信号比值为Y轴,建立了标准曲线方程y=0.3784x-0.7239,相关系数R2为0.9877,检测限为3log2;批内和批间变异系数均小于10%;在4℃至少保存半年;与HI试验对比,对已免疫过的鸡、鸭、鹅临床血清样品,进行定量检测符合率为81.78%,表明本试纸条可用于多种禽类临床样品的定量检测。4.鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条的研制与初步应用用于定性和定量检测的MG抗体检测胶体金试纸条,确立的最佳反应体系为:吸水垫H5073,金标垫Fusion4,样品垫Ahlstrom8964,包被液PBS缓冲液（pH7.4）+3%甲醇,样品垫封闭液PB缓冲液（pH6.0）作为基础液,C线包被羊抗鼠IgG（0.5mg/mL）,T线包被MG-vlhA1.2蛋白（0.6mg/mL）,金标抗体的喷量为7μL/cm。该试纸条与禽的其它重要病原阳性血清无交叉反应,特异性强;结合胶体金免疫定量速测仪,以SPA效价为X轴,以（T/C）信号比值为Y轴,建立了标准曲线方程y=0.3325x+1.0681,相关系数R2为0.9938,检测限为1:2-2,灵敏度比SPA法高8倍;批内和批间变异系数均小于10%;在4℃至少保存半年;与SPA检测对比,对未免疫的鸡、鸭、鹅临床血清样品进行定性检测符合率分别为80.58%、85.48%、83.72%;对已免疫的种鸡临床血清样品进行定量检测符合率为85.38%,表明本试纸条可用于禽类MG感染后的快速诊断和疫苗免疫后的抗体水平定量检测。