目的： 通过Tat47-57转导肽转运内含反义RNA的MS2 VLPs和siRNA，为MS2 VLPs作为药物载体进行探讨，以及为siRNA的细胞内转运提供新方法。 方法： 将编码MS2成熟酶蛋白和衣壳蛋白的序列插入pET28(b)载体，构建包装载体pET-MS2，并将该载体与pACYC-HIV质粒共同转入感受态E.Coli BL21(DE3)，筛选阳性菌落，用IPTG诱导表达16hr，超声波碎菌，形成MS2 VLPs。经过CsCl密度梯度离心纯化后用于交联。 通过化学合成的方法获得Tat47-57转导肽，在交联剂Sulfo-SMPB作用下，等摩尔比的Tat47-57转导肽与MS2 VLPs交联，形成Tat-MS2 VLPs交联物。与Hela细胞孵育6 hr，通过FITC直接标记VLPs或间接免疫荧光法在荧光显微镜下观察结果。 从人HCV阳性血清中提取HCV RNA，RT-PCR扩增获得HCV 5’UTR和IRES序列，反向插入pACYCDuet-1表达载体，形成pACYC-HCV质粒，同时构建正向插入载体的阴性对照。pACYC-HCV质粒与pET-MS2包装载体同时转入感受态E.Coli BL21(DE3)，IPTG诱导表达16 hr，超声波碎菌，形成内含反义RNA的MS2VLPs。经过CsCl密度梯度离心纯化，RT-PCR鉴定VLPs，然后与等摩尔比的Tat47-57转导肽交联，交联物与含HCV-萤光素酶报告基因的Huh-7细胞孵育，24 hr后检测细胞内萤光素酶活性。 利用Tat47-57转导肽转运针对HCV Con 1b 5’UTR区的siRNA。在交联剂Sulfo-SMPB作用下，等摩尔比的Tat47-57转导肽与siRNA交联，形成Tat-siRNA交联物。分别取含0.5μg、1.0μg和1.5μg的交联物与含HCV复制子的Huh-7细胞孵育24 hr，在荧光显微镜下观察细胞摄取结果，检测萤光素酶活性，用实时(real-time)荧光定量PCR方法检测细胞中HCV RNA的浓度。同时用Lipofectamine 2000转染1.0μg的siRNA，作为对照。 结果： 利用双质粒表达系统，MS2衣壳蛋白成功的包装了外源RNA，形成了MS2VLPs，与Tat47-57转导肽化学交联后转入了Hela细胞，用FITC直接标记VLPs或间接免疫荧光法在荧光显微镜下均可以观察到发黄绿色荧光的细胞。 将内含反义RNA的MS2 VLPs与Tat47-57转导肽通过交联剂Sulfo-SMPB交联后，在转导肽的作用下VLPs转入了含HCV-萤光素酶报告基因的Huh-7细胞。并且在细胞内反义RNA下调了萤光素酶的表达。 Tat47-54转导肽和HCV 5’UTR区siRNA的交联物与含HCV复制子的Huh-7细胞孵育24-48 hr后，在荧光显微镜下可以观察到发红色荧光的细胞。裂解细胞，检测萤光素酶活性及对HCV RNA浓度定量检测结果说明，与对照相比较，不同剂量的交联物均可抑制萤光素酶活性，并且随剂量的增加抑制作用也相应增强。 结论： 采用化学交联法将HIV-1 Tat47-57转导肽和MS2 VLPs交联，为转运MS2 VLPs进入细胞提供了新方法。 利用双质粒表达系统形成的内含针对HCV 5’UTR和IRES区反义RNA的MS2VLPs，在Tat47-57转导肽作用下成功的转入了Huh-7细胞，而且包装的反义RNA下调了靶基因的表达。通过该研究，为反义RNA和MS2 VLPs的转运提供了新方法。 通过化学交联形成Tat47-57转导肽和siRNA交联物，可以将siRNA转入细胞，而且，转运的siRNA下调了靶基因表达。通过这一研究为转运siRNA进入哺乳动物细胞提供了新方法。