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目的:养真接骨胶囊由骨碎补、续断、川芎、自然铜、黄瓜子、乳香、没药、土鳖虫、红花和制川乌等十味中药组成,具有补益肝肾、强筋壮骨、行气活血、消肿止痛的功效,能加速成骨,促进骨愈合,用于治疗骨折等症,具有确切的疗效,但是缺乏全面的质量控制方法,本研究以2010版药典为依据,建立处方中续断、乳香、土鳖虫和川芎四味药的薄层鉴别方法,乌头碱的限量检查及柚皮苷和川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法,以完善养真接骨胶囊的质量控制标准。
方法:
1.制备工艺研究
1.1粉碎工艺为避免有效成分流失,保证药效,经查阅相关文献,将部分黄瓜子、部分骨碎补、自然铜、土鳖虫、川芎粉碎成细粉入药。
1.2水煎工艺选用L9(3)4正交表安排实验,以出膏率为考察指标,以加水量、提取时间、提取次数为考察因素,优选提取工艺。
1.2.1出膏率测定按处方量5倍称取药物,按优选的水煎方法提取、精制,浓缩,干燥,精密称定重量,计算出膏率。
1.3中试研究按照确定的工艺路线,中试生产3批样品,并对3批中试成品进行了检测。
2.质量标准研究以规范的制备工艺加工制成的养真接骨胶囊为研究对象,从薄层鉴别和含量测定方面进行研究,建立和完善养真接骨胶囊的质量标准。
2.1薄层鉴别方法采用薄层色谱法,分别对供试品溶液的制各方法、展开剂系统、检视方法等条件进行优化,对处方中续断、乳香、土鳖虫和川芎等四味中药进行了薄层鉴别研究。
2.2限量检查采用薄层色谱法,对处方中对乌头碱进行了限量检查。
2.3含量测定方法建立HPLC法测定养真接骨胶囊中柚皮苷和川续断皂苷Ⅵ含量的方法,并进行方法学研究。结果:
1.制剂工艺研究结果
1.1粉碎工艺优选工艺为:将部分黄瓜子、部分骨碎补、自然铜、土鳖虫、川芎烘干研细过100目筛。
1.2水煎工艺
1.2.1水煎工艺优选工艺为:取部分黄瓜子、部分骨碎补、制川乌、乳香、没药、续断、红花,置夹层锅内加水煎煮两次,第一次加水8倍,煎煮1小时;第二次加水6倍,煎煮40分钟,合并提取液,滤过,选用多效浓缩器进行浓缩至相对密度1.25(90℃)左右,常压浓缩。
1.2.2出膏率测定照制备工艺方法进行煎煮提取,考察有效成分是否浸出,结果显示本工艺平均出膏率为10.0％。
1.3制备工艺研究制剂工艺为:将部分黄瓜子、部分骨碎补、自然铜、土鳖虫、川芎烘干研细过100目筛;取部分黄瓜子、部分骨碎补、制川乌、乳香、没药、续断、红花,置夹层锅内加水煎煮两次,第一次加水8倍,煎煮1小时,第二次加水6倍,煎煮40分钟,合并提取液,滤过,浓缩至相对密度1.25(90℃)左右,常压浓缩;以黄瓜子、自然铜等药材的细粉收清膏,烘干;烘干后的清膏粉碎成细粉,装入空心胶囊,即得。
三批中试试验结果表明本制备工艺平均成品率为99.33%,试验结果表明制定的制剂工艺是稳定可行的。
2.质量标准研究
2.1薄层鉴别
建立了成品中续断、乳香、土鳖虫和川芎4味药的薄层鉴别方法。试验表明,方法专属性、重现性良好,在供试品色谱中,与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点,可以证明养真接骨胶囊中续断、乳香、土鳖虫和川芎的存在。
2.2限量检查
以乌头碱对照品作为对照,在供试品色谱中,与对照品色谱相应的位置上,供试品乌头碱斑点含量小于对照品,符合要求。
2.3高效液相色谱法测定柚皮苷的含量
采用反相高效液相色谱法建立了成品中柚皮苷的含量测定方法。方法学试验表明,本方法专属性良好,柚皮苷在浓度为300-1800μg/mL范围内呈良好线性关系,回归方程为y=2334.8x+917l,相关系数r=0.9999;精密度试验对照品RSD为0.30%,供试品RSD为0.33%;稳定性试验表明柚皮苷在24 h内峰面积稳定,对照品RSD为0.27%,供试品RSD为0.41%;重复性试验RSD为0.95%;平均回收率为98.06%,RSD为4.08%。
2.4高效液相色谱法测定川断皂苷Ⅵ的含量
采用反相高效液相色谱法建立了成品中川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法。方法学试验表明,本方法专属性良好,川续断皂苷Ⅵ在浓度为400-2400μg/mL范围内呈良好线性关系,回归方程为y=2407.5x+12609,相关系数r=0.9999;精密度试验对照品RSD为0.37%,供试品RSD为0.72%;稳定性试验表明川续断皂苷Ⅵ在24 h内峰面积稳定,对照品RSD为0.30%,供试品RSD为0.29%;重复性试验RSD为0.87%;平均回收率为97.23%,RSD为4.83%。
结论:
1.通过试验确定了养真接骨胶囊的最佳制剂工艺,该工艺稳定、可行;
2.建立的薄层鉴别方法专属性强,斑点清晰,可对制剂中的中药进行准确鉴别;高效液相色谱法进行含量测定,准确度高、专属性强、重现性好,可对制剂质量进行有效控制;