长江中下游地区湖北钉螺小尺度景观群体的种群遗传结构研究

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日本血吸虫病(Schistosomiasis)作为人畜共患的寄生虫病,严重危害着人类的健康,成为我国现今面临的重要公共卫生问题之一。湖北钉螺(Oncomelania hupensis)是日本血吸虫(Schistosoma japonicum)的唯一中间宿主,其分布范围与日本血吸虫的分布范围高度一致,在血吸虫病的传播过程中起关键作用。湖北钉螺主要分布于我国长江流域及以南的江苏、浙江、安徽、江西、福建、上海、湖南、湖北、广东、广西、云南、四川等12个省、直辖市、自治区。由于湖北钉螺不同种群间隔距离较远,存在一定的地理隔离,导致我国不同地区种群间产生了明显的遗传变异,进而分化为多个不同的亚种。由于温度、湿度、海拔等外界环境的区别,不同环境下的钉螺对血吸虫病的易感性也不同,且差异显著。因此,湖北钉螺遗传多态性分析,对于研究日本血吸虫和湖北钉螺的相互作用、钉螺群体扩散机制、血吸虫病低感染率情况下的主动监测等工作都具有重要的理论指导意义以及医学上的实用价值。本研究基于实验室已经获得湖北钉螺线粒体全基因组序列和已建立湖北钉螺微卫星DNA文库的基础上,首先选用rDNA-ITS序列对长江下游三省不同地理环境下的湖北钉螺群体遗传结构进行了研究,探究rDNA-ITS分子标记在钉螺扩散路径监测中的应用价值;其次,对比了两种DNA试剂盒的抽提效果及性价比,并选出合适的抽提试剂盒对课题组所需的1548份钉螺样本进行DNA抽提处理;最后,利用微卫星标记对湖北松滋市湖北钉螺小尺度景观群体进行遗传结构研究,分析了湖北松滋地区湖北钉螺小尺度景观群体的遗传结构。获得结果如下:(1)天根DNA抽提试剂盒和OMEGA DNA抽提试剂盒比较发现:OMEGA试剂盒抽提效果好,但费用较高,为16元/1样本;天根试剂盒抽提效果一般,但费用较低,为8元/1样本。考虑到样本的条件和经费的限制,决定2012年后采集的500个样本采用天根DNA提取试剂盒抽提单个钉螺基因组;2012年前采集的1048个样本,采用OMEGA DNA提取试剂盒抽提单个钉螺的基因组。(2)利用rDNA-ITS基因序列对长江下游3省不同湖北钉螺群体进行了遗传多样性分析,结果显示3省9个种群均显示出较丰富的遗传多样性;AMOVA分析结果显示,9个种群的钉螺遗传差异主要存在于个体间;单倍型家系网络图将所有单倍型分成3个主要的家系,江苏高淳湖北钉螺种群中同时存在原始类型(共享单倍型)、家系间和家系内过渡类型、变异末端类型,表明该种群存在遗传异质性;研究亦表明rDNA-ITS分子标记在钉螺扩散路径监测中的效用值得进一步研究探讨。(3)利用微卫星标记对湖北松滋地区进行了小尺度景观群体的遗传结构研究,研究结果表明,尽管松滋地区湖北钉螺螺壳形态表现出光壳、浅肋、深肋三种形态,不过微卫星DNA扫描各钉螺群体显示,虽然群体内遗传多样性较高,但是遗传变异主要来自于群体个体间,各景观环境的钉螺群体间遗传分化不明显;因此,尽管各钉螺群体的遗传距离与地理距离表现出一定的相关性,但相关性并不显著;目前推测可能是由于受到不同的生态环境的影响,导致壳型有所不同。无论是光壳还是肋壳,由UPGMA聚类分析推测,应属于同一亚种。
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