【摘 要】
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目的:本课题组前期研究发现,糖尿病大鼠颈动脉窦压力感受性反射(carotid sinus baroreceptor reflex,CSR)的敏感性降低,而丙泊酚的使用会加大对CSR的抑制作用,表明糖尿病患者术中应用丙泊酚会增加其心血管事件的发生率,加大围术期麻醉管理的风险。研究发现,AMPA受体GluR2亚基和GABAA受体是介导压力感受器与脑干疑核之间最主要的兴奋性神经递质受体和抑制性神经递质受
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目的:本课题组前期研究发现,糖尿病大鼠颈动脉窦压力感受性反射(carotid sinus baroreceptor reflex,CSR)的敏感性降低,而丙泊酚的使用会加大对CSR的抑制作用,表明糖尿病患者术中应用丙泊酚会增加其心血管事件的发生率,加大围术期麻醉管理的风险。研究发现,AMPA受体GluR2亚基和GABAA受体是介导压力感受器与脑干疑核之间最主要的兴奋性神经递质受体和抑制性神经递质受体,因此本研究旨在探讨丙泊酚加重糖尿病大鼠CSR抑制与疑核内AMPA受体GluR2亚基和GABAA受体的关系,为机制的进一步探索提出新的思路和方法,以期为临床工作提供借鉴。方法:第一部分:选择SD雄性大鼠36只,随机分为三大组:对照组(N组)、糖尿病组(D组)和AMPA受体激动剂糖尿病组(A组),每组按照所给药物的不同分为两组:生理盐水组(NN组、DN组和AN组)、丙泊酚组(NP组、DP组和AP组)。按照上述分组分别给予相应的药物,随后用K-H液隔离灌流大鼠颈动脉窦区,观察并记录大鼠平均动脉压(MAP)随窦内压(ISP)升降的变化情况,绘制出ISPMAP曲线,计算其CSR机能参数。灌流结束后,断头取脑,采用免疫印迹法和免疫荧光法检测各组大鼠疑核中AMPA受体GluR2亚基的表达水平。第二部分:选择SD雄性大鼠36只,随机分为两大组:对照组(N组)和糖尿病组(D组),每组按照所给药物的不同分为三组:生理盐水组(NN组和DN组)、丙泊酚组(NP组和DP组)和GABAA受体拮抗剂+丙泊酚组(NPG组和DPG组)。按照上述分组分别给予相应的药物,随后用K-H液隔离灌流大鼠颈动脉窦区,观察并记录大鼠平均动脉压(MAP)随窦内压(ISP)升降的变化情况,绘制出ISP-MAP曲线,计算其CSR机能参数。灌流结束后,断头取脑,采用免疫印迹法检测各组大鼠疑核中GABAA受体的表达水平。结果:第一部分:1.CSR机能参数:(1)在股静脉泵注药物相同的情况下,与N组相比,D组曲线整体呈上移趋势,PS、RD减小,TP、SP增大,而A组较D组曲线整体趋势有所下移,PS、RD增大,TP、SP减小。(2)与股静脉泵注生理盐水组(NN、DN、AN组)相比,泵注丙泊酚组(NP、DP、AP组)曲线整体呈上移趋势,PS、RD减小,TP、SP增大。2.利用免疫印迹法(Western-blot)和免疫荧光法检测各组疑核内AMPA受体GluR2亚基的表达水平,与N组(NN组、NP组)相比,D组(DN组、DP组)疑核内AMPA受体GluR2亚基表达下调,而A组(AN组、AP组)较D组蛋白表达有所增加,差异均具有显著性(P<0.05),N组与A组差异无统计学意义(P>0.05)。与股静脉泵注生理盐水组(NN组、DN组)相比,股静脉泵注丙泊酚组(NP组、DP组)疑核内AMPA受体GluR2亚基表达下调(P<0.05),AN组与AP相比无明显统计学差异(P>0.05)。第二部分:1.CSR机能参数:(1)与N组相比,D组曲线整体呈上移趋势,PS、RD减小,TP、SP增大。(2)与泵注生理盐水组(NN组、DN组)相比,泵注丙泊酚组(NP组、DP组)曲线整体趋势上移,PS、RD减小,TP、SP增大。加入GABAA受体拮抗剂后再泵注丙泊酚(NPG组、DPG组),曲线整体趋势有所下移,PS、RD增大,TP、SP减小。2.利用免疫印迹法(Western-blot)检测各组疑核中GABAA受体的表达水平,从总体看,与N组(NN组、NP组)相比,D组(DN组、DP组)疑核内GABAA受体表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。与股静脉泵注生理盐水组(NN组、DN组)相比,股静脉泵注丙泊酚组(NP组、DP组)疑核内GABAA受体表达增加(P<0.05),而疑核内微量注射Bicuculline后经股静脉泵注丙泊酚组(NPG组、DPG组)较NP、DP组GABAA受体的表达减少(P<0.05)。结论:1.丙泊酚和糖尿病均能抑制大鼠CSR,糖尿病大鼠应用丙泊酚后,CSR的抑制效应更为明显。2.糖尿病大鼠对CSR的抑制作用主要与其使疑核内兴奋性受体GluR2亚基下调,以及抑制性受体GABAA受体下调,导致疑核放电减少有关。3.丙泊酚对CSR的抑制作用主要与其使疑核内兴奋性受体GluR2亚基下调,抑制性受体GABAA受体上调有关。4.推测丙泊酚加重糖尿病大鼠CSR抑制作用的可能机制:糖尿病大鼠疑核放电减少,给予丙泊酚后疑核内兴奋性受体GluR2亚基进一步减少,抑制性受体GABAA受体大大增加,进一步加大了对疑核的抑制作用,最终导致对CSR的抑制作用增加。
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