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第一部分MiR-590-5P和S100A10的表达及关系分析目的探讨miR-590-5P和S100A10基因在人肝癌细胞及正常肝细胞中的表达差异。方法培养人正常的肝细胞及多种肝癌细胞株，取对数生长期细胞，Trizol法提取Total RNA，使用特异性反转录引物反转录制备cDNA，设计针对成熟体miR-590-5P的PCR检测引物，荧光定量法检测成熟体miR-590-5P含量。取对数生长期细胞，抽提细胞总蛋白，BCA蛋白定量，Western blot检测S100A10蛋白含量。分析miR-590-5P及S100A10在肝癌细胞及正常肝细胞中的表达差异。结果荧光定量检测结果显示，miR-590-5P在人肝癌细胞中低表达(与正常肝细胞比较，p＜0.01)；S100A10蛋白含量则在肝癌细胞中高表达。结论miR-590-5P在人肝癌细胞中低表达，S100A10基因在人肝癌细胞中高表达，二者之间存在负相关趋势。第二部分MiR-590-5P与S100A10之间调控关系分析目的分析miR-590-5P与S100A10表达之间可能存在的调控关系。方法提取人基因组DNA， PCR扩增miR-590-5P前体序列，构建pcDNA-miR-590-5P重组质粒。提取人Total RNA，反转录制备cDNA，PCR扩增S100A10基因的3’UTR区，将S100A10的3’UTR区克隆到PGL3-promoter荧光素酶表达载体，构建pS100A10-3’UTR-PGL3重组质粒。使用脂质体转染的方法将报告基因重组载体及miRNA重组载体共转染293细胞，使用双荧光素酶检测系统，以海肾荧光素酶作为参照，检测细胞干预前后荧光素酶的变化趋势。若miR-590-5P能够抑制pS100A10-3’UTR-PGL3报告基因的萤光素酶表达，则采用点突变的方法使S100A10-3’UTR中位于miR-590-5P上的结合位点即种子序列发生碱基突变，然后通过检测，观察其抑制作用是否还继续存在或消失。将慢病毒包装质粒混合物及重组表达载体pcDNA-miR-590-5P共转染慢病毒包装细胞系（293T），采用Lv-miR-590-5P重组慢病毒进行包装和生产，同时采用比例稀释法来检测其病毒滴度，通过预实验来确定研究中慢病毒感染HepG2细胞的最佳MOI值。以最佳MOI值使用慢病毒颗粒对HepG2细胞进行感染，在感染72h后，检测HepG2细胞的感染效率，然后收集HepG2细胞，再分别提取其总RNA和总蛋白，采用RT-PCR和Western blot的方法检测miR-590-5P和S100A10之间的关系。结果成功构建了pcDNA-miR-590-5P重组表达载体及pS100A10-3’UTR-PGL3报告基因重组质粒。在293细胞中转染pcDNA-miR-590-5P，可以抑制pS100A10-3’UTR-PGL3载体表达荧光素酶，而当3’-UTR进行突变修饰后，pmir-590-5P不能够抑制其表达。通过慢病毒系统在HepG2细胞中高效表达mir-590-5P，细胞中mir-590-5P的过表达抑制了S100A10基因表达。结论S100A10为miR-590-5P的靶基因。在肝癌细胞中过表达miR-590-5P，可以抑制S100A10基因表达。第三部分MiR-590-5P对于肝癌细胞HepG2的影响目的通过慢病毒途径在HepG2细胞中过表达miR-590-5P，观察基因干预对于细胞增殖活性，细胞周期，钙离子浓度，细胞侵袭能力及相关蛋白含量的影响。方法使用重组慢病毒Lv-miR-590-5P和对照病毒Lv-GFP，以最佳MOI值感染HepG2细胞，感染后72h，荧光显微镜下观察细胞，通过绿色荧光蛋白（GFP）表达判断细胞的感染效率。取病毒感染后的细胞，胰酶消化的方法制备细胞悬液，接种细胞到96孔板中，正常条件培养24、48、72h后，CCK-8法检测细胞增殖活性。收集病毒感染后72h细胞，台酚蓝细胞染色后进行活细胞计数，接种细胞到6孔细胞培养板，正常条件培养24h，收集对数期细胞，然后使用75%乙醇固定细胞24h，Rnase处理细胞，PI染色，通过流式细胞仪检测细胞周期。感染后72h，胰酶消化的方法制备细胞悬液，Transwell检测细胞侵袭能力变化。取病毒感染后的细胞，台酚蓝细胞染色后进行活细胞计数，接种细胞到6孔细胞培养板，正常条件培养24h，收集对数期细胞，进行钙离子浓度检测。取病毒感染后的细胞，采用胰酶消化的方法将其制备成一定浓度的细胞悬液，再将接种细胞置于6孔细胞培养板上，在正常条件下培养接种细胞24h，收集对数期细胞，进行相关蛋白含量检测。使用细胞蛋白提取试剂盒提取细胞总蛋白，BCA法进行蛋白定量。使用Western blot检测WNT通路相关蛋白（WNT5a、E-cadherin、Caspase3、cMyc、CyclinD1、MMP7）含量，及β-catenin蛋白磷酸化程度。并使用光密度分析软件对目的条带进行灰度值分析。结果通过慢病毒途径，可以在肝癌细胞HepG2中获得100%的基因转导效率。在肝癌细胞HepG2中过表达的miR-590-5P，不仅可以明显抑制患者肿瘤细胞的增殖活性，还会引起其细胞周期发生停滞，进而加剧对肿瘤细胞侵袭能力的抑制作用。在肝癌细胞中过表达miR-590-5P，可明显抑制WNT5a、cMyc、CyclinD1、MMP7蛋白表达，而促进E-cadherin、Caspase3蛋白表达，同时，miR-590-5P的过表达可引起β-catenin蛋白的磷酸化，加速其降解。结论在人肝癌细胞中过表达miR-590-5P，可以抑制WNT通路的激活，可以抑制肿瘤细胞增殖活性，使肿瘤细胞停滞与G1期，降低细胞钙离子含量，抑制肿瘤细胞侵袭能力。miR-590-5P在HepG2细胞中过表达，可有效抑制细胞的肿瘤活性。