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目的1.研究播散性毛孢子菌病小鼠模型中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Regulatory T cells, Tregs)的动态表达变化；2.研究细胞因子白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β1 (TGF-β1)在播散性毛孢子菌病小鼠模型中动态表达变化；3.分析Foxp3+调节性T细胞比率与IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA、IL-10、TGF-β1表达水平变化的关系,分析试验组小鼠肾脏载菌量与调节性T细胞比率、IL-10mRNA、TGF-β1 mRNA、血清IL-10、TGF-β1表达水平的关系,初步探讨Foxp3+调节性T细胞与细胞因子IL-10、TGF-β1在播散性毛孢子菌病发病机制中可能发挥的作用。方法1.构建播散性毛孢子菌病小鼠模型：50只雄性BALB/c小鼠随机分为试验组和对照组,每组25只,分别尾静脉接种T.asahi悬液和生理盐水,0.3ml/只；2.接种后第3,7,14,21及28天,无菌超净台取小鼠肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺和脑组织分别行真菌培养,常规HE染色和PAS染色,观察小鼠各组织真菌感染状况及病理损伤程度,统计不同感染时间小鼠组织真菌感染阳性数目；3.利用平皿稀释法对对试验组小鼠不同感染时间左侧肾脏进行载菌量测定,作为判断小鼠感染严重程度的评估指标；4.接种后第3,7,14,21及28天,利用流式细胞术检测两组小鼠脾脏单个核细胞悬液中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+T细胞比率；5.接种后第3,7,14,21及28天,应用实时荧光定量PCR方法检测两组小鼠脾脏组织中Foxp3 mRNA、IL-10mRNA和TGF-β1 mRNA水平表达情况；6.接种后第3,7,14,21及28天,内眦静脉取血,离心获得血清,通过双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组小鼠血清IL-10和TGF-β1分泌水平；7.利用Pearson线性相关分析方法,分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比率与小鼠血清IL-10和TGF-β1浓度及脾脏组织中IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA表达水平的关系；8.利用Pearson线性相关分析方法,分析接种后第3,7,14,21及28天试验组小鼠肾脏载菌量与调节性T细胞比率、脾脏Foxp3 mRNA、脾脏IL-10 mRNA、脾脏TGF-β1 mRNA、血清IL-10、血清TGF-β1浓度的关系。结果1.成功构建播散性毛孢子菌病小鼠模型：试验组小鼠接种菌悬液后第3d和第7d,小鼠全部脏器组织真菌培养结果阳性；第14d和第21d,25只小鼠肾脏组织真菌培养均阳性,肝脏、脾脏、心脏、肺、脑组织真菌培养部分阳性；第28d,仅2只小鼠肾脏组织真菌培养阳性,其他组织真菌培养均阴性；对照组小鼠肝脏、脾脏、心脏、肺、脑组织真菌培养结果全部阴性。HE染色可见试验组小鼠各组织不同程度淋巴细胞、中性粒细胞浸润,血管轻至中度扩张、充血；对照组未见明显异常。试验组小鼠组织PAS染色阳性者可见紫红色菌丝和孢子,对照组未见菌丝及孢子。2.试验组小鼠肾脏载菌量在接种后第3天为(69.5±9.1) cfu/mg,第7天载菌量达到峰值,为(120.3±11.4) cfu/mg,其后载菌量逐渐减少,第14天减少为(36.3±10.9) cfu/mg,第21天为(20.8±8.9) cfu/mg,第28天为(2.0±2.5) cfu/mg。3.试验组小鼠脾脏Foxp3+调节性T细胞比率在感染中后期表达增高,接种第3天与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)：第7天较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；第14天达到最高值,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)：其后逐渐下降,第21天仍较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)；第28天降至正常水平,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。4.感染后第3天,试验组小鼠脾脏组织中Foxp3 mRNA、IL-10 mRNA, TGF-β1 mRNA水平均较对照组升高,但差异无统计学意义(P<0.05)；第7天较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；第14天达到最高值,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)：其后逐渐下降,第21天仍较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)；第28天降至正常水平,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。5.感染后第3天,试验组小鼠血清IL-10和TGF-β1水平与对照组相比,差异均无统计学意义(P<0.05)；第7天较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)：第14天达到最高值,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)：其后逐渐下降,第21天仍较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)；第28天降至正常水平,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。6. CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与小鼠血清IL-10和TGF-β1浓度及脾脏组织中IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA表达水平均呈明显正相关(P<0.05)。7.第7、14、21d,试验组小鼠肾脏载菌量分别与调节性T细胞比率、脾脏组织中Foxp3 mRNA、IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA水平、血清IL-10浓度、血清TGF-β1浓度呈明显正相关(P<0.05)：第3、28d,试验组小鼠肾脏载菌量与调节性T细胞比率、脾脏组织中Foxp3 mRNA、IL-10 mRNA、TGF-β1 mRNA、血清IL-10浓度、血清TGF-β1浓度无明显相关性(P>0.05)结论1. T.asahi引起的播散性毛孢子菌病小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞及细胞因子IL-10、TGF-β1在感染中后期表达增高,呈先增高后逐渐下降至正常水平的趋势,调节性T细胞及细胞因子IL-10、TGF-β1参与播散性毛孢子菌感染的免疫应答反应；2.调节性T细胞与小鼠血清IL-10和TGF-β1浓度及脾脏组织中IL-10 mRNA、 TGF-β1 mRNA表达水平呈明显正相关,提示调节性T细胞可能通过分泌抑制性细胞因子IL-10、TGF-β1发挥免疫调节作用；3.调节性T细胞及细胞因子IL-10、TGF-β1可能一方面减弱了机体清除T.asahi的能力,为T.asahi的存活提供了有利条件；另一方面可能减轻了过度炎症反应对机体的组织损伤程度,促进了组织损伤修复。