【摘 要】
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第一部分:F344 大鼠树突状细胞的分离与培养目的:寻求一种简便、高效的F344 大鼠树突状细胞（DCs）分离与培养的方法。方法:选近交系F344 大鼠16 只,每次取1 只,戊巴比妥麻醉,心
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第一部分:F344 大鼠树突状细胞的分离与培养目的:寻求一种简便、高效的F344 大鼠树突状细胞（DCs）分离与培养的方法。方法:选近交系F344 大鼠16 只,每次取1 只,戊巴比妥麻醉,心脏穿刺取血处死大鼠;75%酒精溶液浸泡,彻底消毒,取大鼠股骨、胫骨、肱骨,彻底剔除肌肉,剪去骨两端;RPMI1640 培养基冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,经过滤、密度梯度离心得到淋巴单核细胞;完全RPMI1640 培养基培养,加入rrGM-CSF、rrIL-4,置37℃、5%CO2培养箱中培养;培养过程中每天倒置显微镜下观察细胞形态变化;培养第4 天电镜观察DCs 形态;培养第4、8、15 天流式细胞仪鉴定DCs 表面抗原OX62、MHC-II、CD86 的表达情况;同时在显微镜下进行细胞计数。结果:培养第4 天,倒置显微镜、电镜观察DCs 出现典型的树枝状突起。培养第4 天OX62 阳性率为8.92%、MHC-II 为20.9%、CD86 为16.98%;第8 天OX62 阳性率为58.07%、MHC-II 为60.49%、CD86 为62.94%;第15 天OX62 阳性率为84.68%、MHC-II 为88.03%、CD86 为62.80%。显微镜下细胞计数DCs 数量为每只1.0×1072.0×107。结论: 1. 应用密度梯度分离加细胞培养法可分离纯化出纯度较高（80%以上）的大鼠DCs。2. 该密度梯度分离法得到的DCs 数量大（1.0×1072.0×107）,与单抗排除法、免疫磁珠法相当。3. 该密度梯度分离法简单易行、费用低。
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