表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),是绿茶中茶多酚的提取物,具有抗氧化、抗病毒、抗癌、增强免疫力等多种生物活性功能。国内外已有研究表明,EGCG标准品对草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)以及对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)具有一定的抑制作用。稀有鮈鲫作为对GCRV病毒高度敏感的新型模式生物,可以为后期EGCG在鱼体水平的抗病毒研究提供实验样本。本研究通过使用35%、50%以及99%三种浓度的EGCG粗提物,在细胞水平上对EGCG抗GCRV病毒进行了验证。探究用药后EGCG对不同细胞活性和草鱼血浆中各种酶活性的影响。研究EGCG在草鱼、稀有鮈鲫以及南美白对虾体内的药代动力学,为后期临床用药提供参考。主要研究结果如下:1、EGCG粗提物能有效抑制GCRV对CIK细胞的感染利用不同浓度的EGCG粗提物孵育草鱼肾脏细胞(CIK),感染GCRV病毒并观察病毒的感染复制情况,用real-time PCR技术,检测细胞上清中GCRV病毒的表达量,并计算用药后GCRV病毒对CIK细胞感染率的变化情况。分析实验结果可知,随着细胞上清中加入EGCG粗提物含量的升高,GCRV病毒感染CIK细胞的效率显著降低,细胞中CPE现象明显减少,细胞上清中病毒滴度也明显下降。证明EGCG粗提物具有良好的抑制GCRV病毒感染的效果。2、EGCG粗提物对鱼类是安全无毒性作用的绿色药物为了探究EGCG粗提物的安全性。本研究用35%、50%和99%三种浓度的EGCG粗提物孵育了CIK、草鱼性腺细胞(CGO)、胖头鲤肌肉细胞(FHM)和鲤上皮瘤细胞(EPC)等四种鱼类细胞,并检测细胞活性。在实验水温(17±1)℃条件下,用99%EGCG粗提物按体质量50 mg/kg和100 mg/kg分别腹注草鱼,并检测草鱼血浆中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、溶菌酶(LZM)三种酶活性。结果显示,EGCG孵育四种细胞后,细胞活性仍保持在80%~97%之间,表明三种EGCG粗提物对鱼类细胞系没有明显的毒性作用。随着腹注EGCG浓度的增加,草鱼血浆中MDA呈下降趋势,GSH和LZM含量增加,表明EGCG粗提物能通过减少鱼体内过氧化反应而达到保护鱼体健康的作用。3、EGCG在草鱼、稀有鮈鲫和南美白对虾体内易吸收代谢快在实验水温(17±1)℃条件下,用99%EGCG粗提物按体质量150 mg/kg腹注草鱼,实验水温(22±1)℃条件下腹注稀有鮈鲫,肌注南美白对虾。多个时间点取样,采用液-质联用法检测组织中EGCG含量,用统计距原理推算用药后EGCG在各组织中的药动学参数。结果显示,在(17±1)℃条件下,EGCG在草鱼肾脏和血液中的达峰时间均为12h,达峰浓度分别为1630.9 ng/mL和20924.1ng/mL。48h后,草鱼肾脏和血液中的EGCG含量分别为2.087 ng/mL和0.503 ng/mL。在(22±1)℃条件下,EGCG在稀有鮈鲫肌肉中的达峰时间为2h,达峰浓度为5.004μg/mL,在南美白对虾肌肉、肝胰脏中的达峰时间均为0.5h,达峰浓度分别为41.0529μg/mL和2.825μg/mL。24h后,稀有鮈鲫肌肉中EGCG含量为0.014μg/mL,南美白对虾肌肉和肝胰脏中EGCG含量分别为0.912μg/mL和0.162μg/mL。本研究结果表明,EGCG在生物体内的吸收受温度及生物种类影响较大,为后期科学使用EGCG防治草鱼出血病和对虾白斑综合症提供科学依据。