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micro RNA是一类长度约为22个核苷酸的小型非编码RNA分子,属于小RNA(Small RNA)当中的一种,它是由前体RNA经过一系列酶切割而来的,主要负责调控转录和转录后水平的表达。现在对micro RNA的研究方法主要有mi RNA功能缺失突变体、生物信息学预测、正向遗传学和高通量测序等,但这些方法存在效率低、方法灵敏度差和结果易受体系、操作及环境影响等缺点。STTM(Short tandem target mimic)短串联靶标类似物,是人工合成的一段短的目标重复序列,中间有一段核苷酸序列,两端有两个目标mi RNA结合位点,它能与目标mi RNA结合,从而有效的阻止mi RNA与目的基因的结合,导致目的基因的积累,STTM是用来研究mi RNA功能的最简单有效的方法。本文主要在烟草中利用STTM对一些与抗逆相关的mi RNA(mi R398、mi R164、mi R167、mi R169)进行研究。主要工作内容包括以下几个方面:1、对STTM398、STTM164、STTM169、STTM167分别设计引物,经PCR扩增得到目的片段,将目的片段与载体连接,构建了p ZHY807-sttm398、p ZHY807-sttm164、p ZHY807-sttm167、p ZHY807-sttm169和p ZHY807-sttm48nt表达载体。2、用农杆菌介导烟草的遗传转化,首先确定Basta筛选压的浓度,经过共培养、筛选培养、生根培养等过程长成植株。3、通过PCR检测来筛选得到阳性植株,一共得到27株阳性苗,分别为4株STTM164、6株STTM167、7株STTM169、4株STTM398以及6株STTM48nt,将得到的所有阳性植株进行继代培养,并将其移栽到土壤中收获T1代种子。4、对得到的STTM164、STTM167、STTM169、STTM398、STTM48nt T0代阳性植株和野生型植株用20%的PEG进行抗旱处理,并检测相对水含量,膜保护酶活力(SOD和POD)和牛血清蛋白含量等生理生化指标,验证mi R164、mi R169、mi R167和mi R398的抗旱功能。实验结果发现SOD在处理3到6天的过程中总体呈现先下降后上升的趋势,STTM164与其他植株相比变化幅度最大,STTM398、STTM164、STTM167、STTM169与STTM48nt和野生型相比均没有显著性差异;POD在处理3到6天的过程中含量不断上升,在处理6天之后,STTM164与STTM48nt和野生型相比有显著性差异;牛血清蛋白含量在处理6天之后各个植株含量明显下降,各个植株均没有显著性差异;相对水含量在整个处理过程中没有太大变化,STTM164在处理6天之后有一个轻微上升趋势。综合分析发现mi R164可能与干旱胁迫有关。