RMP在60Coγ-射线诱导的肝癌细胞DNA修复中的作用

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目的:研究肝癌细胞抵抗60Coγ-射线引起的凋亡的机制,探索RMP在肝癌细胞抵抗60Coγ-射线引起的DNA损伤程度中的影响,分析RMP在肝癌细胞抵抗辐射引起的DNA损伤和凋亡的作用机制方法:1.流式细胞术确认肝癌细胞(7721、HepG2)与正常肝细胞(7702、L02)在抵抗60Coγ-射线损伤引起的凋亡方面的差异。2.运用彗星电泳检测肝癌细胞(7721、HepG2)与正常肝细胞(7702、L02)在60Coγ-射线处理后不同时间点的损伤和修复3.以γH2AX作为指标,用免疫荧光法检测肝癌细胞与正常肝细胞在不同时间点的损伤程度从而确认上述结果。4.利用qRT-PCR技术检测不同时间点各个细胞中的RMP的野生型表达。5.在肝癌细胞7721细胞中通过瞬转RMP后,利用彗星电泳技术以及免疫荧光技术检测不同时间点的损伤和修复6.在正常肝细胞7702细胞中通过瞬转不同的质粒进入到细胞中改变7702细胞的RMP表达,利用彗星电泳技术检测不同时间点的损伤修复结果:1.凋亡结果显示肝癌细胞(7721、HepG2)在60Coγ-射线处理后早期凋亡的出现比正常肝细胞(7702、L02)要晚,而且凋亡的程度要低于正常肝细胞。证明肝癌细胞要比正常肝细胞对γ-射线引起的凋亡更不敏感。2.彗星电泳技术检测出的结果发现肝癌细胞与正常肝细胞在开始的时候的损伤差别并不大,但是在30min-1h时肝癌细胞(7721、HepG2)的损伤修复速度要快于正常肝细胞(7702、L02),且修复后损伤程度较后者要低。3.免疫荧光的结果显示肝癌细胞(7721)与正常肝细胞(7702)在损伤细胞数占总细胞数比例上的无差异,但是在每个细胞中的DNA损伤程度有差异,肝癌细胞的每个细胞中的γH2AX点平均在1h左右降低到比较低的值,比正常肝细胞要快且同一时间点γH2AX的点数要低于正常肝细胞,这与彗星电泳的结果相符,进一步证明了损伤修复的结果可靠性。4.qRT-PCR结果显示在1h肝癌细胞中的RMP表达量升到最高,正常肝细胞中的RMP表达无明显变化。5.发现彗星电泳检测到的肝癌细胞中的DNA的修复速度较之前更快,而且相同时间点检测到的DNA损伤程度,过表达RMP的7721-O瞬转细胞系要低于对照组7702细胞系。干扰RMP后发现瞬转了干扰质粒的7721-RI瞬转细胞系的DNA修复过程受到阻碍,免疫荧光技术检测到的γH2AX指标显示的结果显示RMP能增强肝癌细胞的损伤修复速度,这与彗星电泳检测的结果相符。qRT-PCR显示各质粒在细胞中得到了预期的表达。6.RMP的表达量变化对于正常肝细胞7702细胞的DNA修复能力没有明显的影响。结论:本课题发现RMP的表达和肝癌细胞的DNA的损伤修复有着明显的线性关系,RMP能够促进肝癌细胞的DNA损伤修复,但是在正常肝细胞中却没有显示出促进DNA修复的结果。且肝癌细胞的野生型表达也显示出了抑制凋亡的结果,这提示我们RMP通过促进细胞的DNA损伤修复从而提高细胞的存活率来抵抗凋亡时是值得探索的。
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