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CED-9是从动物线虫(C.elegance)中克隆出来的抗凋亡基因,属于Bcl-2家族,与哺乳动物中的抗凋亡基因Bcl-2同源。本文将CED-9基因通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105介导转化烟草和拟南芥,并研究CED-9基因在植物抗逆境中的功能,获得以下结果: 1.将CED-9小片段连接到中间载体pBS上以获得合适的酶切位点,将酶切下来的CED-9小片段连接到诱导型表达载体pER8上,成功构建了诱导型表达载体pER8-ced9:通过农杆菌EHA105介导,用真空浸润法转到拟南芥中,用潮霉素对转基因种子筛选获得抗性植株。 2.从质粒pBS中获取CED-9基因片段,构建中间载体pGEM-ced9以获得合适的酶切位点。在此基础上再构建重组表达载体pBI-ced9,通过农杆菌EHA105介导,将CED-9基因导入烟草叶片组织中,筛选得到再生植株,经PCR和Southern点杂交检测显示,目的基因确已整合到烟草基因组中。 3.转基因烟草植株后代遗传分析,表明其中4个株系的转基因后代小苗Kan抗性呈3:1的分离比,并用RT-PCR检测到2个株系的烟草后代有CED-9基因的表达。 4.通过与野生型烟草对照,研究了CED-9基因在烟草的抗逆境中的功能,结果显示CED-9基因能提高烟草对金属Al和盐的抗性,并对烟草的生长发育产生一定的影响。