人参皂甙单体Rh2对人脑胶质瘤U251细胞凋亡作用的实验研究

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目的人参皂甙单体Rh2是从人参中提取的天然活性成分。目前大量研究表明,该药抗肿瘤作用与传统化疗药物有所不同,因此深入研究其抗肿瘤作用机制将具有重要的现实意义。本实验通过体外培养人脑胶质瘤U251细胞,经人参皂甙单体Rh2干预处理后,观察该药对人脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用,进而探讨其对脑胶质瘤U251细胞端粒酶活性的影响和人端粒酶逆转录酶表达的机制,从而为该药应用到临床中提供实验基础和理论依据,也为脑胶质瘤的临床药物治疗提供一种有效途径。方法人脑胶质瘤U251细胞经GS-Rh2处理后,采用MTT法检测脑胶质瘤细胞增殖抑制率,并求出细胞半数致死浓度(IC50),倒置显微镜下观察药物作用前后细胞形态学变化,通过免疫荧光技术观察细胞凋亡情况及凋亡小体的出现,采用流式细胞仪经Annexin V-FITC/PI双染法观察药物作用后细胞凋亡率的改变,经TRAP-ELISA法检测该药对人脑胶质瘤U251细胞内端粒酶活性变化的影响,运用RT-PCR技术检测药物作用后细胞内hTERT mRNA表达水平的变化。结果人参皂甙单体Rh2对人脑胶质瘤U251细胞具有明显抑制作用,并呈现剂量依赖性关系,求得IC50为25.2μg/mL,倒置显微镜下发现药物作用前后细胞出现异常变形,通过免疫荧光技术观察到U251细胞形态学的变化和凋亡小体的出现,经流式Annexin V-FITC/PI染色后发现GS-Rh2可以引起U251细胞凋亡并与药物浓度存在依赖性关系,TRAP-ELISA法检测发现GS-Rh2可以降低细胞内端粒酶活性,且呈剂量和时间依赖性关系,运用RT-PCR技术证实GS-Rh2可降低细胞内hTERT mRNA的表达。结论1、人参皂甙单体Rh2能够抑制人脑胶质瘤U25l细胞的增殖,进而促使脑胶质瘤U251细胞发生凋亡,导致凋亡小体的出现。2、人参皂甙单体Rh2可以抑制和降低人脑胶质瘤U25l细胞内端粒酶活性,并与时间和剂量呈明显依赖性关系。3、通过RT-PCR发现人参皂甙单体Rh2作用于脑胶质瘤的分子生物学机制可能与抑制胶质瘤U251细胞内hTERT mRNA表达有关,进而诱导细胞发生凋亡。
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