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一.研究目的本研究通过观察200mmol/L、300mmol/L与400mmol/L等不同浓度的高渗钠盐液(HS)和乳酸钠林格液(LR)对严重烫伤大鼠液体复苏的效果,并从炎症因子、氧化应激反应和信号转导通道等方面探讨不同浓度的高渗钠盐复苏液对严重烫伤大鼠肠损伤影响的初步机制。二.研究方法健康成年SD大鼠104只(购自安徽医科大学实验动物中心),雌雄不限,体重在200-250g。大鼠适应性饲养一周后随机分成五组:正常对照组(8只)、乳酸钠林格液组(LR组,24只)、200mmol/L高渗钠盐液组(HS200组,24只)、300mmol/L高渗钠盐液组(HS300组,24只)、400mmol/L高渗钠盐液组(HS400组,24只)。所有大鼠均尾静脉置管,剃除背部毛发,对照组的大鼠不予烫伤和补液,LR组与各HS组大鼠背部经98℃水烫伤12s造成30%体表面积III度烧伤。烫伤后分别采用LR、200 mmol/L HS、300mmol/L HS与400mmol/L HS进行复苏。LR组与各HS组的大鼠均在伤后2h、8h和24h处死取血和肠组织。第一部分:不同浓度的高渗钠盐复苏液对严重烫伤大鼠血钠、肠含水量以及炎性细胞因子表达的影响将抽取的血标本用生化分析仪测量血清钠浓度;分别称取对照组、LR组、HS200组、HS300组与HS400组的大鼠的肠湿重(W)与干重(D),并计算肠含水量(以“湿重/干重”表示);使用酶联免疫吸附法(ELISA)测量血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和高迁移率蛋白B1(HMGB1)含量。将取得数据进行统计分析。第二部分:不同浓度的高渗钠盐复苏液对严重烫伤大鼠肠道氧化应激反应以及肠血管内皮细胞的影响取对照组、LR组、HS200组、HS300组与HS400组大鼠的一部分肠组织进行丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和二胺氧化酶(DAO)活性等的测定。另一部分肠组织在使用10%甲醛固定后使用免疫组化法测定血管性血友病因子(v WF)的表达。第三部分:不同浓度的高渗钠盐复苏液对严重烫伤大鼠肠组织p38MAPK以及JNK通道的影响采用蛋白质印迹法(Western Blot)测定五组大鼠肠组织中p38MAPK以及JNK通道的活性并进行统计学分析。三.结果第一部分LR组血钠浓度各时间点明显低于HS200组、HS300组与HS400组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组血钠浓度相比,HS200组在伤后2h、24h增高(P<0.05),在伤后8h无明显差异(P>0.05),HS300组和HS400组在各时间点均明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与HS200组相比,HS300组血钠浓度各时间点无明显差异(P>0.05),HS400组血钠浓度各时间点均明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与HS300组相比,HS400组仅在伤后24h显著增高(P<0.05),其他时间点无统计学差异。LR组和HS200组在各时间点的肠湿干重比(W/D)均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),HS300组的伤后8h、24h以及HS400组的伤后8h的W/D明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),其他时间点无明显统计学差异。与LR组的肠W/D相比,HS200组和HS300组在伤后2h、8h明显降低(P<0.05或P<0.01),伤后24h无统计学差异,HS400组在各时间点均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。HS200组、HS300组和HS400组之间的肠W/D无明显差异(P>0.05)。与对照组相比,LR组的各时间点的血TNF-α和IL-1β含量均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);HS200组和HS300组在伤后2h、8h以及HS400组的伤后8h的血TNF-α含量均显著增高(P<0.05或P<0.01);三个HS组的各时间点的IL-1β含量均明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01);LR组、HS200组和HS300组在伤后8h、24h以及HS400组的伤后24h的血HMGB1含量均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),它们在伤后2h的血HMGB1含量均无统计学差异。与LR组相比,HS200组、HS300组与HS400组在伤后2h、8h的血TNF-α含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);它们在各时间点的血IL-1β含量均显著减低(P<0.01),它们在伤后8h和24h血中HMGB1含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);它们在伤后24h的血TNF-α含量以及在伤后2h的血HMGB1含量均无明显差异(P>0.05)。除HS400组在伤后24h的血HMGB1的含量明显高于HS200组(P<0.05)外,三个HS组在各时间点的血TNF-α、IL-1β、血HMGB1的含量均无明显差异(P>0.05)。第二部分LR组、HS200组、HS300组与HS400组在各时间点的肠组织MDA含量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与LR组的肠组织MDA含量相比,HS300组与HS400组在各时间点均显著降低,HS200组在伤后2h、8h明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与HS200组相比,HS300组在各时间点的肠组织MDA含量无明显差异(P>0.05),HS400组在各时间点的肠组织MDA含量均明显降低(P<0.05或P<0.01);与HS300组相比,HS400组在各时间点的肠组织MDA含量无统计学差异(P>0.05)。与对照组的肠组织SOD活性相比,LR组各时间点、HS200组和HS300组在伤后8h均明显增大,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。HS300组和HS400组在伤后8h的肠组织SOD活性显著低于LR组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。HS200组、HS300组和HS400组之间在各时间点的肠组织SOD活性无明显差异(P>0.05)。LR组、HS200组、HS300组与HS400组的肠组织DAO活性均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与LR组的肠组织DAO活性相比,HS200组在各时间点无统计学差异,HS300组在伤后2h、24h以及HS400组在各时间点均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。除HS400组和HS300组在伤后2h的DAO活性比HS200组增高(P<0.05或P<0.01)外,三个HS组之间在伤后其他时间点的DAO活性均无明显差异(P>0.05)。肠组织v WF免疫组化结果显示:与LR组比较,HS200组、HS300组与HS400组在各时间点的肠组织v WF表达有不同程度的增强,且随着HS浓度的增加而更明显。第三部分与对照组相比,LR组和HS200组肠组织p38MAPK的活性在各时间点均明显增强(P<0.05或P<0.01),HS300组在伤后8h、24h增强,HS400组在伤后8h增强,差异具有统计学意义(P<0.01)。与LR组相比,HS200组、HS300组与HS400组肠组织p38MAPK的活性在各时间点均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。HS400组在各时间点的肠组织p38MAPK活性均显著低于HS200组,在伤后2h、8h明显低于HS300组,差异具有统计学意义(P<0.01)。HS300组在伤后8h、24h的肠组织p38MAPK活性均明显低于HS200组,差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,LR组在伤后各时间点、HS200组在伤后8h、24h以及HS300组和HS400组的肠组织JNK活性在伤后8h均显著增强,差异具有统计学意义(P<0.01)。采用三组HS复苏,在各时间点的肠组织JNK活性均明显低于LR组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与HS200组的肠组织JNK活性比较,HS300组在HS伤后24h明显降低,HS400组在伤后8h、24h明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);与HS300组比较,HS400组在伤后2h、8h的肠组织JNK活性明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。四.结论1.三组高渗钠盐复苏液与LR比较,均能防止低钠血症的发生,减轻严重烫伤大鼠伤后的肠道水肿并能抑制相关炎性因子的表达,三组作用上无明显差异。但是,使用400mmol/L的HS进行液体复苏,其血钠浓度明显增高。2.三组高渗钠盐复苏液与LR比较,均能减轻严重烫伤大鼠伤后肠道的氧化应激反应,可以有效保护肠血管内皮细胞,其中使用400mmol/L的HS复苏的效果最好。3.三组高渗钠盐复苏液与LR比较,均能降低严重烫伤大鼠伤后肠组织中p38MAPK和JNK的活性表达,其中使用400mmol/L的HS复苏的效果最好。