【摘 要】
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本文首先研究了36肽扶素康的Fmoc法固相化学合成。系统地研究了扶素康的Fmoc固相逐步化学合成和Fmoc固相片断缩合化学合成。Fmoc固相逐步化学合成的工艺条件为:以DMF为反应溶
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本文首先研究了36肽扶素康的Fmoc法固相化学合成。系统地研究了扶素康的Fmoc固相逐步化学合成和Fmoc固相片断缩合化学合成。Fmoc固相逐步化学合成的工艺条件为:以DMF为反应溶剂;HBTU/HOBt/DIEA为缩合剂;王树脂为固相载体;TFA/p-甲基苯酚/EDT/水(97/0.25/0.25/2.5,V/V)为切割条件,保护氨基酸2倍过量进行缩合反应。固相片断缩合化学合成扶素康中,建立了合成全保护多肽片段的合成方法:以2-氯三苯甲基树脂和王树脂为固相载体;HBTU/HOBt/DIEA为缩合剂;DMF为反应溶剂,HOAc/TFE/ DCM(1:2:7,体积比)为切割条件。在片段缩合中,系统研究了多肽片断的分段策略、片断缩合溶剂、片断缩合剂对片断缩合法合成扶素康质量的影响,确立了优化的片段缩合工艺条件为:将扶素康按残基1~10,11~20,21~25,26~36分作4段;以王树脂为固相载体;HATU/HOAt/DIEA为缩合剂(4倍过量);DMF/DCM(1:1)为反应溶剂;每步加入的全保护肽段为1.5倍过量;缩合及脱保护完成后以DCM为洗涤溶剂洗涤5次,进行固相片段缩合反应。该条件下合成的扶素康,粗品收率达67.31%,按标准曲线定量分析其纯度达38.75%。通过对扶素康粗品的分离纯化研究,确立了纯化工艺路线为:先用离子交换层析进行初步纯化,再以反相高效液相制备层析进行最终纯化。经离子交换层析后产品的纯度提高到78%,收率为55%;最终纯化结果纯度达95%。两步纯化的总收率为35%。
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