论文部分内容阅读
目的1.在糖尿病大鼠视网膜中,研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因表达随时间变化,及透射电镜下观测大鼠视网膜微血管超微结构的变化。2.探讨经玻璃体腔注射抗VEGF新药lucentis和CTGF shRNA后,CTGF和VEGF mRNA表达水平及视网膜微血管超微结构的改变。方法1.将48只大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和正常对照组(CON组),在造模成功后8、10、12周取大鼠视网膜标本行逆转录实时定量PCR检测VEGF和CTGF的基因表达变化。同时在各时点取各组大鼠眼杯,经戊二醛固定,透射电子显微镜观察。2.根据实验1结果,在造模后10周,将DM大鼠随机分为lucentis单靶点干预组,CTGF shRNA单靶点干预组,lucentis和CTGF shRNA双靶点干预组,未干预组,以及正常对照组。干预1周后取各组大鼠的视网膜标本,行实时定量PCR检测VEGF和CTGF的基因表达及透射电镜观察。结果1.实验1：在第8周时DM组大鼠视网膜CTGF mRNA水平较正常组显著增高(P=0.037)且一直持续到第12周(P=0.032,P=0.039),而VEGF的mRNA水平在第10周较正常对照组开始升高,持续到12周,差异均有统计学意义(P=0.043,P=0.036)。2.实验1：CON组未见异常,DM组从第8周开始出现异常改变,表现为视网膜血管内皮细胞肿胀,向管腔突出,细胞核内异染色质凝集居边,细胞质内线粒体明显肿胀,粗面内质网呈池样扩张,毛细血管基底膜增厚。且随着病程延长,改变更加明显,可见到闭锁的毛细血管,以DM12组最为显著。3.实验2：Lucentis单靶点干预组,VEGF基因表达较DM未干预组显著降低(P=0.014),而CTGF表达较DM未干预组则显著升高(P=0.048);CTGF shRNA单靶点干预组,CTGF mRNA水平降至与正常对照组相似(P=0.825),而且VEGF mRNA表达也降低(P=0.026)；双靶点干预组,VEGF和CTGF mRNA较未干预组均明显下调(P<0.001.P=0.001),与正常对照组无显著区别(P=0.292.P=0.287)。4.实验2：CON组视网膜毛细血管管腔平滑完整,内皮细胞扁平紧贴于连续的基膜上。DM未干预组视网膜毛细血管内皮细胞水肿,异染色质边集。毛细血管管腔狭窄。双靶点干预组毛细血管腔较完整,内皮细胞稍水肿,周细胞清晰完整,超微结构接近于正常对照组。Lucentis和CTGF shRNA单靶点干预组仍可见视网膜毛细血管管腔狭窄,内皮细胞水肿,异染色质边集,超微结构完整性明显低于双靶点干预组。结论在早期DM大鼠视网膜内,VEGF和CTGF的基因表达即开始升高,且CTGF升高较VEGF早。Lucentis单靶点干预虽然在大鼠视网膜中降低VEGF的表达,但也造成CTGF mRNA水平的反应性增高；Lucentis结合CTGF shRNA的双靶点干预能同时降低VEGF和CTGF基因在糖尿病大鼠视网膜中的表达,且其视网膜微血管超微结构的改变明显优于单靶点干预。