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目的:肺癌是人类主要致死性癌症之一,其中非小细胞肺癌（Non-small-cell-lung-cancer,NSCLC）占80-85%。分子靶向药物,特别是表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制剂已成功用于治疗肺癌。第一代EGFR抑制剂（EGFR-Tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs）和第二代EGFR-TKIs虽然是NSCLC治疗的一线用药,但耐药是这类药物临床使用的共性问题。因此,需要开发新一代EGFR-TKIs或开发新型EGFR抑制剂。我们课题组经过对化合物的初步筛选,发现了一个全新结构的喹唑啉衍生物YS-363,并分别在分子、细胞和动物水平进行了评价。研究方法:1.首先通过与468种激酶的相互作用确定与YS-363结合率较高的激酶,进一步通过激酶抑制剂活性评价实验确定YS-363对EGFR wt及EGFR敏感突变型的靶向抑制活性。2.分别选用NSCLC肺腺癌细胞株A549、19号外显子缺失突变的NSCLC细胞株PC-9、EGFR wt高表达的人皮肤癌细胞株A431和EGFR耐药突变T790M NSCLC细胞株NCI-H1975,通过Western Blot实验检测EGFR信号通路相关蛋白EGFR、P-EGFR、ERK、P-ERK、AKT以及P-AKT的表达水平,在细胞水平进一步评价了YS-363的靶向性和可逆性。3.通过SRB实验检测YS-363对不同组织来源细胞株的增殖抑制作用,进一步通过克隆形成实验、划痕损伤修复实验和流式细胞术分别评价了YS-363对A549、PC-9和A431细胞增值、迁移、周期阻滞和细胞凋亡的影响。4.选用A431构建了细胞移植瘤模型,进一步评价了YS-363的体内抗肿瘤作用。在雄性SD大鼠体内研究了化合物YS-363在雄性SD大鼠体内的初步药代动力学。结果:1.通过与468种激酶的相互作用,发现50 n M YS-363对EGFR wt、EGFR（E746-A750del）、EGFR（G719C）、EGFR（G719S）、EGFR（L747-E749del）、EGFR（L747-S752del）、EGFR（L747-T751del,Sins）、EGFR（L858R）、EGFR（L861Q）、EGFR（S752-I759del）、MAP4K3和PIK3CA（Q546K）有较高的结合率。进一步的激酶抑制活性筛选表明YS-363对EGFR wt和EGFR L858R表现出优异的抑制活性,IC50分别为0.96 n M和0.6678 n M。2.在细胞水平,YS-363显著抑制了EGFR wt及EGFR敏感突变型细胞株的EGFR及其下游信号通路ERK和AKT的磷酸化,而不影响EGFR耐药突变T790M细胞株NCI-H1975的EGFR、ERK和AKT的磷酸化。撤药实验进一步证实YS-363对EGFR靶向抑制作用具有可逆性。3.YS-363对所有实验肿瘤细胞均具有增殖抑制作用,其中在A549、NCI-H1975、AGS、MKN-1和PC-9中抑制活性与Gefitinib相似,而在BGC-823、HGC-27、MGC-803、NCI-H1299、H460、SGC-7901细胞株中YS-363的抑制作用强于Gefitinib。其中,YS-363对NCI-H1299、PC-9和A431显示出较强的增殖抑制活性,IC50分别为2.479μΜ、0.038693μΜ和2.373333μΜ。此外,YS-363显著抑制PC-9和A431细胞克隆形成能力和划痕损伤修复能力,并能诱导G1期阻滞和细胞凋亡,且作用与阳性药Gefitinib相当。4.在小鼠体内,YS-363显著抑制了A431构建的裸鼠移植瘤的生长,Western Blot检测证实YS-363在体内可以抑制EGFR及其下游AKT和MAPK信号通路,作用与阳性药Gefitinib相同。所有实验组均没有出现裸鼠体重下降的情况。初步YS-363药代动力学分析发现YS-363半衰期很短,不足1小时。结论:1.YS-363是一个EGFR选择性和可逆性抑制剂,可在细胞水平抑制EGFR及其下游信号通路。2.YS-363在细胞水平显著抑制了EGFR wt扩增及其敏感突变型肿瘤细胞的增殖和迁移,并能够诱导细胞周期阻滞和凋亡。3.YS-363在体内显著抑制了A431细胞移植瘤的生长,并且抑制了EGFR及其下游信号通路,表现出了显著的抗肿瘤作用。初步药代动力学实验表明YS-363半衰期较短。