Zmcdc5片段的原核表达和纯化

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:sylviawan
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1976年,Nurse等在筛选裂殖酵母(S.pombe)细胞周期进程突变体的过程中得到了基因cdc5,后来经实验证明CDC5对细胞周期G2期到M期的转换是必需的:cdc5突变后造成细胞无法完成G2/M转换而死亡;过量表达CDC5会缩短G2期,同时缩短整个细胞周期,并导致细胞变小。后来发现,CDC5基因还在转录和前体mRNA的剪接过程中发挥着重要的作用,并且与NIPP1、PRL、IL-2、FGF-2及DLK等因子相互作用。 本实验室根据玉米胚芽和胚根差异表达的研究,克隆得到Zmcdc5基因的cDNA,并通过筛库和反向PCR获得了Zmcdc5基因组全长序列。 本实验是以Zmcdc5的cDNA为模板,使用PCR获得基因片段,再通过酶切连接,将得到的0.8kb的基因片段构建于pET-30a表达载体上,经过诱导表达和纯化,获得Zmcdc5的融合蛋白,其中包括了ZmCDC5 925个氨基酸中647~914共267个氨基酸残基.大小为35.4kDa,并制备得到了抗体。通过Western检测和点杂验证了抗体的正确性和效价,并对玉米不同组织中的CDC5进行了初步的Western检测。
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