应用外周血和骨髓来源的血管内皮祖细胞治疗实验性大鼠股动脉闭塞症

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目的:观察自体外周血来源及同种异体骨髓来源的血管内皮祖细胞移植治疗实验性大鼠股动脉闭塞症的可行性与疗效。 方法:选取:28只雄性Wistar大鼠,结扎并断离双侧股动脉,建立实验性股动脉闭塞大鼠模型。研究分为两部分:(1)自体外周血单个核细胞移植治疗大鼠实验性后肢缺血症:心脏抽血,经密度梯度离心获得单个核细胞,分别在12只实验性双股动脉闭塞大鼠右侧后肢通过多点肌肉注射法移植外周血单个核细胞悬液1ml(0.5-2×107/ml)(A1组);同体左侧相同部位注射生理盐水作为对照(B1组)。分别在移植当天、移植后14天和28天行双下肢激光多普勒扫描,并于移植后第28天处死动物取双下肢肌肉组织,行HE染色和免疫组织化学(FⅧ)检查,FⅧ染色用于标记血管内皮细胞。(2)同种异体骨髓来源的血管内皮祖细胞移植治疗大鼠实验性后肢缺血症:分离纯化雄性Wistar大鼠MSCs,体外培养、多种生长因子联合诱导分化后以5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记血管内皮祖细胞;16只实验性双股动脉闭塞大鼠右侧后肢移植骨髓来源的血管内皮祖细胞(A2组);同体左侧相同部位注射生理盐水作为对照(B2军医迷修李沈硕士李位论灰中夫摘要组)。分别在移植当天、移植后14天和28天行双下肢激光多普勒扫描,并分别于移植后第14天和第28天处死动物取双下肢肌肉组织,行HE染色和免疫组织化学(Fvll】、BrdU)检查。结果:第一部分:(l)A,组移植后血流量(用伏特表示,V)明显增加:移植后14天(2 34士0.26v)与移植当天(1 .77士0.20v相比,尸一0.0067。移植后28天(2.6士o.z6v)与移植后14天(2.34士0.26V)相比,P=0.0394;与移植当天(1 .77士0.20V)相比,P一0.0003。移植后14天及28天,Al组下肢血流量明显高于BI组:移植后14天AI组(2.34士o.26v)与B,组(2.06士0.19v)相比,尸一0.0216:移植后28天Al组(2.6土。一6v)与Bl组(2.12士o.15v)相比,尸一0.0007。(2)移植后28天Al组平均每中倍视野Fylll染色阳性的毛细血管数目显著多于Bl组:分别为8.86土1.59个和5.46士1 .06个(尸一0.0()00)。第二部分:(l)A:组移植后下肢血流量明显增加:移植后14天(2.43士0.29V)与移植当天(1 .85士0.26V)相比,P=0.()007。移植后28天(2.81士0.22V)与移植后14天(2.43士0.29V)相比,尸一0.0252;与移植当天(2 .85士0.26V)相比,尸一0.0000。移植后14天及28天,A:组和B:组相比,血流量增加显著:移植后14天军医进修李沈硕士学位论久中文摘要A:组(2.43士0.2‘)V)与B:组(2.04士0.19V)相比,P=0.0124:移植后28天A:组(2.81土o.22v)与B:组(2.12士0.17v)相比,尸一0.0003。(2)BrdIJ免疫组化染色发现茂组肌束间有血管内皮细胞呈现Brdu阳性染色,而B:组无一例呈现Brdu阳性染色。(3)平均每视野FVlll染色阳性的毛细血管数目A:组(12.1士2.5个)显著多于BZ组(5.4士1.0个),尸=0.0000。结论:制备同一活体双下肢实验性股动脉闭塞大鼠模型.分别用同种异体MSCS体外培养并诱导分化而来的血管内皮祖细胞及自体外周血单个核细胞移植,移植侧与对照侧相比,缺血肌肉组织中的血流量及毛细血管密度显著增多,且在移植处增多的毛细血管内皮细胞中,发现有BulU染色阳性的细胞,证实增殖的新生血管来源于外源性血管内皮祖细胞。提示:自体外周血单个核细胞与骨髓间充质干细胞中均含有血管内皮祖细胞,均能在缺血的活体组织中增殖分化成新生毛细血管的内皮细胞,其血管再生作用显著超过大鼠自身在缺血环境中的血管重建或再生。
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