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胰岛移植是治疗1型糖尿病较为理想的方法,然而远期效果并不乐观,移植后期的失败与移植物的细胞组成有密切关系。本研究拟采用无限增殖的胰岛β和α细胞系,探讨不同比例的胰岛α细胞、α细胞条件培养基以及rhGLP-1(7-36)对β细胞胰岛素分泌与合成功能的影响,探索移植时α细胞与β细胞的最适宜比例。在此比例下,胰岛α细胞对β细胞起最佳的调节作用,以求达到最好的移植效果,使糖尿病患者移植后获得类似生理状态下的胰岛素分泌,达到长期控制糖尿病代谢紊乱的目的,提高患者生活质量。 目的: 探讨胰岛α细胞、胰岛α细胞条件培养基及外源性rhGLP-1(7-36)对胰岛β细胞(INS-1细胞)胰岛素释放及胰岛素mRNA水平的影响。 方法: 1、在培养的INS-1细胞中,①分别加入不同比例的胰岛α细胞(0%、3%、10%、30%),在20mmol/L葡萄糖的刺激下,分别孵育30、60、120、240分钟后收集上清,用放射免疫法测定胰岛素含量;②分别加入不同比例的胰岛α细胞(0%、3%、10%、30%),在不同浓度的葡萄糖(终浓度分别为1.85、5.6、16.7、50mmol/L)刺激下,孵育240分钟,收集上清,用放射免疫法测定胰岛素含量;③利用RT-PCR技术对与胰岛α细胞共同孵育的INS-1细胞的胰岛素mRNA水平作半定量分析。 2、在培养的INS-1细胞中,①分别加入不同比例的胰岛α细胞条件培养基(胰岛