论文部分内容阅读
目的：研究通过油酸诱导水通道蛋白9(AQP9)在HepG2肝癌细胞株上的表达情况及水通道蛋白9对HepG2肝癌细胞株迁移能力的影响,探讨水通道蛋白9在肝癌转移过程中的可能作用及临床意义。方法：1.将HepG2肝癌细胞株分为3组。按3个浓度梯度添加油酸溶液(0,250,500μmol/L),在37℃,5%CO2的培养箱中培养24小时,培养后的细胞样品提取蛋白质后用Western blot检测AQP9蛋白表达程度,用划痕实验检测细胞迁移能力。2.将HepG2肝癌细胞株分为2组,实验组预先加入AgNO3(3×1O-5M)在37℃,5%CO2条件下培养30分钟预处理后,再加入500μmol/L油酸溶液,另外一组不加任何干预作为对照,继续培养24小时后取各组细胞样本,用Western blot检测AQP9蛋白表达程度,划痕实验检测细胞迁移能力。结果：1.Western blot检测结果显示AQP9在0μmol/L油酸组、250μmol/L油酸组、500μmol/L油酸组HepG2肝癌细胞株的相对表达量分别为(0.679±0.033),(0.804±0.026)和(1.124±0.015),AgNO3抑制剂组与对照组AQP9的相对表达量分别为(0.670±0.025)、(0.679±0.033)。结果提示随着油酸浓度的增加,AQP9表达的强度亦增强(P<0.05),即油酸可上调HepG2人肝癌细胞AQP9的表达且呈剂量依赖性。但加入AgNO3预处理后再加入500μmol/L油酸溶液刺激后的HepG2人肝癌细胞的AQP9表达量与对照组(即没加入油酸及AgNO3干预的HepG2人肝癌细胞)比较无明显差异(P>0.05)。2.细胞划痕实验结果显示Oμmol/L油酸组、250μmol/L油酸组、500μmol/L油酸组HepG2肝癌细胞株迁移比率分别为(1±0.026)(0.813±0.044)、(0.533±0.079)。AgN03抑制剂组与对照组HepG2肝癌细胞株迁移比率为(1.008±0.028)、(1±0.026)。结果提示随着油酸浓度的增高,HepG2人肝癌细胞的迁移能力逐渐增强(P<0.05),但是应用AgNO3抑制了AQP9后,HepG2人肝癌细胞胞株的迁移能力与对照组比较,无明显差异(P>0.05)。3.水通道蛋白9的表达与肝癌迁移的关系：AQP9表达的增加可增强HepG2人肝癌细胞的迁移能力。但是应用AgN03抑制了AQP9后,AQP9表达上调导致的HepG2人肝癌细胞株迁移能力增强的作用因AgN03抑制了AQP9而消失。结论：1.油酸可以上调HepG2肝癌细胞水通道蛋白9的表达,且呈剂量依赖性。2.水通道蛋白9的表达增高提高了HepG2肝癌细胞的迁移能力,提示水通道蛋白9可能与肝癌的迁移有关。