【摘 要】
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噬肺军团菌(Legionella pneumophila)在感染宿主细胞过程中,能够干扰宿主细胞的膜泡运输体系,募集包括源于内质网的光滑膜泡、线粒体和核糖体等细胞器,并逃避吞噬泡的成熟过程,避
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噬肺军团菌(Legionella pneumophila)在感染宿主细胞过程中,能够干扰宿主细胞的膜泡运输体系,募集包括源于内质网的光滑膜泡、线粒体和核糖体等细胞器,并逃避吞噬泡的成熟过程,避免与溶酶体的融合降解,随后在经过修饰的吞噬泡内复制增殖并裂解宿主细胞,进而导致疾病的产生。噬肺军团菌的Dot/Icm四型分泌系统对于其对宿主细胞内的感染非常重要,该四型分泌系统突变的噬肺军团菌进入宿主细胞后所形成的吞噬泡很快经内体成熟途径与溶酶体融合而被降解。Dot/Icm系统可以分泌许多细菌效应蛋白进入宿主细胞内,但是目前对这些效应蛋白还知之甚少。本课题通过对噬肺军团菌基因组数据的生物信息学分析,我们发现噬肺军团菌基因组编码的3个蛋白Lpg2830、Lpg2144和Lpg0171分别含有真核细胞所特有的U-Box(Lpg2830)和F-Box(Lpg2144和Lpg0171)结构域,这两个结构域均广泛存在于真核细胞的泛素系统中,能够单独或与其它细胞成分形成复合物催化泛素修饰反应。在此,通过实验我们验证了Lpg2830在体内体外均拥有泛素连接酶的活性,可以利用UbcH5进行自泛素化修饰,Lpg2144与Lpg0171均能够形成SCF复合物,SCF复合物在真核细胞中能够将底物泛素化修饰并被蛋白酶体识别降解。Lpg2830、Lpg2144与Lpg0171均能够通过四型分泌系统进入宿主细胞,它们通过各自C端的不同定位信号定位于特定的细胞结构,在Cos7细胞中Lpg2830与Lpg0171定位于核周内质网结构,而Lpg2144则定位于细胞质膜上,尽管分别缺失这三个基因对于噬肺军团菌的胞内生长并没有明显影响,但是以上数据表明它们极可能通过干预或者模拟宿主细胞的泛素修饰体系来协助噬肺军团菌在宿主细胞内的生存与复制。
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