金线莲离体培养及其染色体加倍研究

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金线莲是一种具有很高药用价值的草本植物,有清凉解毒,滋阴降火,消炎止痛等功效。在福建、台湾省和东南亚地区被视为名贵药材,因此具有重要的开发价值和广阔的应用前景。由于金线莲对生态环境要求苛刻,生长和自然繁殖缓慢,加上鸟类采食和人工大量采集,野生资源日趋枯竭。金线莲为兰科植物,种子微小,在自然条件下难以萌发,用分根法或扦插等传统方法繁殖也因繁殖系数低而难以形成规模种植。因此,利用组织培养对金线莲进行快速繁殖,有利于金线莲种质资源的保存和产业化发展。同时,因为金线莲价格昂贵而抗病虫能力差,可通过对培养基成分的优化建立高效的无菌培养方法生产无农药污染和质量稳定的金线莲产品。此外,可以通过染色体的加倍,改良金线莲的品质和栽培性状。 本研究以金线莲的几个不同品系的顶芽和茎节为外植体,比较了不同浓度BA和TDZ对金线莲芽体增殖的影响。研究结果表明,在以MS为基本培养基的情况下,1mg/L的BA对芽体的增殖最为有利。TDZ的最适浓度则随品种的不同而有所差异。S材料以0.9mg/L为最好,而Z材料则以0.3mg/L为最佳。在合适的TDZ浓度条件下,芽体的增殖比最合适的2mg/L的BA的作用明显更好。以T4的叶片和茎段为材料,选用了KT+2,4-D,KT+Picloram,Picloram+BA,NAA+TDZ等激素配比试图进行愈伤组织的诱导但没有成功,有关金线莲愈伤组织的诱导条件有待进一步探讨。 以金线莲S和Z的顶芽和茎节为材料,研究培养基不同添加物及其浓度对金线莲生长量的影响。结果显示,添加椰子水比添加水解蛋白更利于金线莲的生长,表现为生物产量更高,且在10%的椰子水时,鲜重和干重达到最大。在相同的培养条件下,茎节比顶芽的生长量大些。以T4茎节为材料,比较了马铃薯和香蕉添加量对生长量的影响。结果表明,添加香蕉比添加马铃薯更有利于金线莲的生长,而以20.0%的添加量为最合适。 染色体加倍的试验结果表明,金线莲T4材料在秋水仙素浓度为300mg/L(含有2%DMSO)时,茎节相对于顶芽受到更明显的抑制作用。随着处理时间的延长,秋水仙素对外植体的毒害作用加强,表现为外植体死亡率增多。300mg/L的秋水仙素处理3天~19天均可导致材料的染色体加,处理13天时,细胞染色体完全加倍率达到最大的72.7%,包括嵌合体在内的不完全加倍率,即诱导率达到91%;金线莲T1材料在秋水仙素浓度时150mg/L(含有2%DMSO)时,处理3天~13天均有染色体加倍效果,在处理9天时,完全加倍率达到最大的75%,诱导率则达到100%;秋水仙素处理前的培养期,即恢复期的长短在试验设定的范围内对秋水仙素处理(浓度为150mg/L,处理2天)的效果没有显著影响;比较金线莲T4材料不同浓度秋水仙素(0、30mg/L,90mg/L,150mg/L)处理30天的加倍效果,结果表明随着秋水仙素浓度的增加,对植株的毒害作用加重。在90mg/L浓度下,完全加倍率最大,达到31.8%,诱导率为100%。
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