第一部分 酪氨酸激酶受体EphB4的磷酸化在食管鳞癌发生发展过程中的功能目的:Eph激酶作为最大的受体酪氨酸激酶家族,在早期发育和成年期中都发挥着重要的作用。近年来Eph家族成员在肿瘤发生发展过程中的作用也得到了广泛的关注。目前的研究表明,EphB4在乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤中都具有重要的功能。但是EphB4在食管癌中的研究还比较少。方法:利用荧光定量PCR、蛋白印迹等方法检测EphB4和其配体ephrin B2在食管鳞癌组织、配对正常组织及食管鳞癌细胞株中的表达;纯化ephrin B2-Fc融合蛋白,并利用ephrin B2-Fc刺激食管鳞癌细胞,利用MTT实验、软琼脂集落实验和Boyden Chamber实验检测ephrin B2-Fc对食管鳞癌细胞生长和迁移的影响;建立过表达EphB4及其激酶活性丧失的突变体（EphB4KD）的细胞稳定株,研究EphB4及EphB4 KD对食管鳞癌细胞生长迁移的影响;利用免疫荧光实验、免疫共沉淀技术和GST-Pull down技术,研究EphB4与RACK1之间的相互作用。结果结果::在本项研究中,我们发现EphB4在配对的食管鳞癌组织（Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC）和食管鳞癌细胞株中呈现高表达的趋势。但是EphB4的配体ephrin B2在配对的食管鳞癌组织中的表达水平下调。在细胞实验中,利用纯化的ephrin B2-Fc融合蛋白刺激食管鳞癌细胞株引起细胞生长抑制、迁移能力下降。并且,EphB4与EphB4激酶活性突变体（EphB4 KD）均可以促进细胞的生长,表明EphB4对细胞生长的促进作用不依赖于其激酶活性。在进一步的分子机制研究中,我们使用酵母双杂交筛选了与EphB4相互作用的蛋白。研究发现接头蛋白RACK1与EphB4相互作用。并且,RACK1有助于维持EphB4的低磷酸化状态。结论论::该研究工作揭示了EphB4的磷酸化在食管鳞癌发生中的功能,提示EphB4的磷酸化状态很可能是食管鳞癌治疗的新的靶点。第二部分 活化的PKC受体（RACK1）在食管鳞癌发生发展过程中的功能及机制研究目的:接头蛋白RACK1包含七个WD40的重复序列,具有调节多种信号转导途径的能力,在细胞生长、迁移、代谢等多种生物学事件中具有重要功能。RACK1在食管鳞癌发生发展中的功能仍不清楚。方法法::利用荧光定量PCR、蛋白印迹等方法检测RACK1在食管鳞癌组织及配对正常组织中的表达;在食管鳞癌细胞中过表达RACK1或抑制RACK1的表达,利用MTT实验、软琼脂集落实验和Boyden Chamber实验检测RACK1对食管鳞癌细胞生长和迁移的影响;利用小动物成像系统,研究RACK1对实验鳞癌细胞体内转移的影响;利用报告基因技术、RT-PCR、蛋白印迹检测、Boyden Chamber实验,检测RACK1对Hedgehog信号通路活性、Hedgehog信号通路下游靶基因的表达的影响。结果果::我们发现了RACK1在食管鳞癌中不依赖于EphB4的新功能。通过荧光定量PCR和Western Blot实验,我们发现RACK1在食管鳞癌中表达上调。在食管鳞癌细胞中过表达RACK1能够促进细胞的生长和迁移,而由RNA干扰介导的对RACK1的表达下调则显著抑制了肿瘤细胞的生长,迁移以及在体内的转移能力。进一步研究发现RACK1是Hedgehog信号通路的正向调控因子。在食管鳞癌细胞中过表达RACK1促进Hedgehog信号通路下游靶基因Gli1和Patch的表达,而下调RACK1的表达抑制Gli1和Patch的表达。干扰Gli1的表达可以部分回复RACK1对细胞生长和迁移的促进作用。结论论::我们的工作揭示了RACK1作为食管鳞癌发生过程中的重要蛋白,通过激活Hedgehog信号通路,促进了肿瘤的生长和转移。